人热休克蛋白60(HSP60)ELISA试剂盒
检测原理:
包被与捕获:试剂盒的微孔板预先包被了能特异性识别人HSP60的捕获抗体。
抗原结合:向微孔中加入待测样本(如血清、血浆、组织匀浆等),样本中的HSP60抗原会与固相上的捕获抗体结合。
形成夹心复合物:洗涤后,加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗人HSP60检测抗体,它会与已被捕获的HSP60结合,形成“固相捕获抗体-HSP60抗原-酶标检测抗体”的夹心复合物。部分试剂盒会采用生物素-亲和素系统进行信号放大。
显色与检测:再次洗涤并加入TMB底物溶液,HRP催化TMB显色(蓝色),加入终止液后变为黄色。颜色的深浅与样本中HSP60的浓度呈正相关。最后,使用酶标仪在450nm波长下测定各孔的吸光度(OD值),通过绘制标准曲线即可计算出样本中HSP60的浓度。
产品名称:
人热休克蛋白60(HSP60)ELISA试剂盒
英文名称:Human HeatShockProteins60,HSP60 ELISA Kit
规格:48T/96T
货号:LZ-E029337
用途:仅供科研研究实验
核心参数概览:
检测方法:双抗体夹心法
检测范围:不同试剂盒的检测范围差异较大,例如 0.312 - 20 ng/mL 或 3.125 - 100 ng/mL。
灵敏度:通常在 < 1.0 ng/mL 级别,例如 0.188 ng/mL 或 3.125 ng/mL。
精密度:
批内变异系数(CV):通常小于 10%
批间变异系数(CV):通常小于 12%
适用样本类型:
该试剂盒适用于多种生物样本,主要包括:
血清
血浆(如EDTA、肝素抗凝)
细胞培养上清液
组织匀浆
细胞裂解液
检测流程简要:
一、试剂平衡:将试剂盒各组分于室温放置20分钟,恢复至常温。
二、加样:设空白孔、标准品孔(梯度浓度)、待测样本孔,每孔加入50μL样本或标准品。
三、孵育结合:每孔再加入HRP标记抗体100μL,37℃避光温育60分钟。
四、洗涤:弃液后用洗涤液洗板5次,拍干。
五、显色:每孔加TMB显色液A、B各50μL,37℃避光反应15分钟。
六、终止:每孔加50μL终止液,颜色由蓝转黄。
七、读数:15分钟内于450nm测定OD值,绘制标准曲线并计算浓度。
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注意事项:
样本要求:溶血的标本会影响检测结果,不宜使用。待测样本应尽早检测,如需保存,应在-20℃或-80℃冷冻,并避免反复冻融。
试剂准备:使用前需将所有试剂置于室温(20-25℃)平衡。浓缩洗涤液若有晶体析出,需在37℃下加热至完全溶解后再稀释使用。
操作规范:
为避免交叉污染,添加每个标准品、样品和试剂时应更换移液器枪头。
底物显色液应呈无色或很浅的颜色,若已变蓝则不能使用。
洗板步骤对结果准确性至关重要,无论是手动还是自动洗板,都应确保洗涤充分,并避免微孔在温育过程中干燥。
任何反应试剂不能接触漂白溶剂或其散发的强烈气体。
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