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| 销售商： 上海联祖生物科技有限公司 | 查看该公司所有产品 >> |
产品属性
| 产品名称 | 人妊娠相关蛋白A(PAPP-A)ELISA试剂盒 | 货号 | LZ-E029328 |
| 英文名称 | Human PAPP-A ELISA Kit | 规格 | 48T/96T |
| 用途 | 仅供科研实验 | 品牌 | 联祖 |
包被与捕获：试剂盒的微孔板上预先包被了能特异性结合人PAPP-A的捕获抗体。
抗原抗体反应：向微孔中依次加入待测样本（如血清、血浆等）和辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体。样本中的PAPP-A（抗原）会同时与包被的捕获抗体和HRP标记的检测抗体结合，形成一个“抗体-抗原-抗体”的夹心复合物，并固定在微孔板上。
洗涤：通过洗涤步骤，去除未结合的游离物质。
显色反应：加入底物TMB（3,3',5,5'-四甲基联苯胺）。在HRP的催化下，TMB由无色变为蓝色。
终止与检测：加入终止液（通常为硫酸）后，反应终止，溶液颜色由蓝色变为黄色。颜色的深浅与样本中PAPP-A的浓度呈正相关。最后，使用酶标仪在450nm波长下测定各孔的吸光度（OD值），通过标准曲线计算出样本中PAPP-A的浓度。
特异性：试剂盒具有高特异性，能识别人源PAPP-A，与人源其他细胞因子无明显交叉反应。
重复性：用于衡量检测结果的稳定性。通常以变异系数（CV）表示，板内和板间变异系数一般均小于15%。
灵敏度：指试剂盒能够检测到的最低PAPP-A浓度。不同试剂盒的灵敏度不同，例如，有的产品灵敏度可低至 < 0.8 mIU/mL。
检测范围：指试剂盒能够准确定量的浓度区间。例如，标准品的浓度范围可能为 1.56 mIU/mL 至 100 mIU/mL。
ELISA试剂盒实验
抗原抗体反应：向微孔中依次加入待测样本（如血清、血浆等）和辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体。样本中的PAPP-A（抗原）会同时与包被的捕获抗体和HRP标记的检测抗体结合，形成一个“抗体-抗原-抗体”的夹心复合物，并固定在微孔板上。
洗涤：通过洗涤步骤，去除未结合的游离物质。
显色反应：加入底物TMB（3,3',5,5'-四甲基联苯胺）。在HRP的催化下，TMB由无色变为蓝色。
终止与检测：加入终止液（通常为硫酸）后，反应终止，溶液颜色由蓝色变为黄色。颜色的深浅与样本中PAPP-A的浓度呈正相关。最后，使用酶标仪在450nm波长下测定各孔的吸光度（OD值），通过标准曲线计算出样本中PAPP-A的浓度。
主要产品性能参数
重复性：用于衡量检测结果的稳定性。通常以变异系数（CV）表示，板内和板间变异系数一般均小于15%。
灵敏度：指试剂盒能够检测到的最低PAPP-A浓度。不同试剂盒的灵敏度不同，例如，有的产品灵敏度可低至 < 0.8 mIU/mL。
检测范围：指试剂盒能够准确定量的浓度区间。例如，标准品的浓度范围可能为 1.56 mIU/mL 至 100 mIU/mL。
适用样本类型
该试剂盒适用于多种生物样本，主要包括：
血清
血浆（如EDTA、肝素抗凝）
细胞培养上清液
组织匀浆
细胞裂解液
ELISA试剂盒的显著优势
1. 极高的灵敏度与特异性
这是ELISA最核心的竞争力。
高灵敏度：得益于酶催化底物的信号放大作用，ELISA能检测到低浓度甚至皮克级（pg/mL）的目标分子。这对于检测血清中微量的细胞因子、激素或早期疾病标志物至关重要。
高特异性：特别是双抗体夹心法（最常用的方法），利用捕获抗体和检测抗体双重识别抗原的不同表位，极大降低了非特异性结合和交叉反应的风险，确保结果的准确性。
2. 高通量与高效率
批量处理：标准的ELISA板通常是96孔或384孔格式，非常适合同时处理大量样本（如大规模筛查）。
自动化兼容：操作流程标准化，极易与自动洗板机、酶标仪等设备配合，减少人为误差，显著提升实验效率。
3. 样本适用性广且无需复杂纯化
多样本类型：可以直接检测血清、血浆、尿液、细胞培养上清液、组织裂解液等多种复杂样本，通常不需要预先纯化抗原。
定量分析：通过标准曲线，可以精确计算样本中目标分子的浓度，提供定量的生物学数据。
4. 安全且成本相对可控
安全性：与放射免疫分析法（RIA）不同，ELISA使用酶标记而非放射性同位素，避免了辐射危害，试剂处理更安全。
设备门槛低：除了酶标仪外，不需要昂贵的大型精密仪器（如流式细胞仪或质谱仪），普通实验室即可开展。
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第一阶段：准备工作 (Pre-preparation)
试剂回温：从冰箱取出试剂盒，将所有试剂（包括浓缩洗涤液、标准品、样本等）在室温（20-25℃）下平衡至少 30分钟。
注意：如果浓缩洗涤液有结晶，需置于37℃水浴助溶并混匀。
标准品稀释：按照说明书要求，使用专用稀释液对标准品进行梯度稀释（通常做7-8个浓度点），现配现用。
样本处理：确保血清、血浆或细胞上清液澄清无沉淀（如有沉淀需再次离心）。
第二阶段：加样与孵育
加样：
在酶标板的对应孔中，分别加入 100 µL（具体体积看说明书）稀释好的标准品和待测样本。
设置空白孔（只加稀释液）。
建议：每个样本做2-3个复孔，数据更可靠。
孵育：
盖上封板膜，放入 37℃ 恒温箱孵育 1-2小时（或按说明书要求，如室温2小时）。
原理：让样本中的抗原与板上的捕获抗体结合。
第三阶段：洗板与检测抗体
洗板（关键步骤）：
弃去孔内液体，每孔加满洗涤液（约300-350 µL），静置浸泡 30-60秒 后甩干。
重复洗涤 3-5次。最后一次需在吸水纸上用力拍干，确保无残留液体。
加检测抗体：
每孔加入 100 µL 稀释好的检测抗体工作液（生物素化抗体）。
盖上封板膜，37℃ 孵育 1小时。
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