固相抗体包被:试剂盒的酶标板微孔中预先包被了能特异性识别人BPI的抗体(捕获抗体)。
抗原-抗体反应:向微孔中依次加入样本(如血清、血浆、组织匀浆、细胞培养上清等)和酶标记的检测抗体(如HRP标记的抗体)。样本中的BPI抗原会同时与固相抗体和酶标检测抗体结合,形成“固相抗体-抗原-酶标抗体”的三明治夹心复合物。
洗涤:通过洗涤步骤,去除未与复合物结合的其他物质。
显色反应:加入底物溶液(通常是TMB)。在酶(如HRP)的催化下,无色的TMB底物会转化为蓝色。
终止与测定:加入终止液(如硫酸)终止反应,溶液颜色由蓝色变为黄色。颜色的深浅与样本中BPI的浓度呈正相关。使用酶标仪在450nm波长下测定各孔的吸光度(OD值),通过标准曲线即可计算出样本中BPI的浓度。
产品属性
| 产品名称 |
人杀菌性/通透性增加蛋白(BPI)试剂盒 |
货号 |
LZ-E029287 |
| 英文名称 |
Human bactericidal/permeabilityincreasingprotein,BPI ELISA Kit |
规格 |
48T/96T |
| 用途 |
仅供科研实验 |
品牌 |
联祖 |
主要产品性能参数
参数类别 具体说明
检测方法 双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)
检测样本 血清、血浆、组织匀浆、细胞培养上清及相关液体样本
检测波长 450nm
特异性 不与其它可溶性结构类似物发生交叉反应
重复性 板内变异系数(CV)通常<10%,板间变异系数(CV)通常<12%
准确性 标准品线性回归与预期浓度的相关系数R值,通常≥0.9900
灵敏度 因产品而异,例如 0.31 ng/mL 或 250 pg/mL
检测范围 例如:1.25-80 ng/mL 或 100-25,000
ELISA试剂盒实验
第一阶段:准备工作 (Pre-preparation)
试剂回温:从冰箱取出试剂盒,将所有试剂(包括浓缩洗涤液、标准品、样本等)在室温(20-25℃)下平衡至少 30分钟。
注意:如果浓缩洗涤液有结晶,需置于37℃水浴助溶并混匀。
标准品稀释:按照说明书要求,使用专用稀释液对标准品进行梯度稀释(通常做7-8个浓度点),现配现用。
样本处理:确保血清、血浆或细胞上清液澄清无沉淀(如有沉淀需再次离心)。
第二阶段:加样与孵育
加样:
在酶标板的对应孔中,分别加入 100 µL(具体体积看说明书)稀释好的标准品和待测样本。
设置空白孔(只加稀释液)。
建议:每个样本做2-3个复孔,数据更可靠。
孵育:
盖上封板膜,放入 37℃ 恒温箱孵育 1-2小时(或按说明书要求,如室温2小时)。
原理:让样本中的抗原与板上的捕获抗体结合。
第三阶段:洗板与检测抗体
洗板(关键步骤):
弃去孔内液体,每孔加满洗涤液(约300-350 µL),静置浸泡 30-60秒 后甩干。
重复洗涤 3-5次。最后一次需在吸水纸上用力拍干,确保无残留液体。
加检测抗体:
每孔加入 100 µL 稀释好的检测抗体工作液(生物素化抗体)。
盖上封板膜,37℃ 孵育 1小时。
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ELISA试剂盒性能指标速查表
性能指标 关键参数 优质标准参考 意义
灵敏度 最低检测限 (LoD) 数值越低越好 能否测出微量样本
特异性 交叉反应率 < 5% (越低越好) 是否只测目标物,不误判
精密度 变异系数 (CV) 批内 < 10%, 批间 < 15% 结果是否稳定、可重复
准确性 回收率 80% - 120% 结果是否接近真实值
线性范围 标准曲线区间 覆盖样本预期浓度 能否准确定量高低浓度