包被与捕获:试剂盒的微孔板上预先包被了能特异性结合人proNGF蛋白的捕获抗体。
抗原抗体反应:向微孔中依次加入待测样本(如血清、血浆、细胞培养上清、组织匀浆等)和辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体。样本中的proNGF蛋白(抗原)会同时与包被的捕获抗体和HRP标记的检测抗体结合,形成一个“抗体-抗原-抗体”的夹心复合物,并固定在微孔板上。
洗涤:通过洗涤步骤,去除未结合的游离物质。
显色反应:加入底物TMB(3,3',5,5'-四甲基联苯胺)。在HRP的催化下,TMB由无色变为蓝色。
终止与检测:加入终止液(通常为硫酸)后,反应终止,溶液颜色由蓝色变为黄色。颜色的深浅与样本中proNGF蛋白的浓度呈正相关。最后,使用酶标仪在450nm波长下测定各孔的吸光度(OD值),通过标准曲线计算出样本中proNGF的浓度。
产品属性
| 产品名称 |
人神经生长因子前体(proNGF)ELISA试剂盒 |
货号 |
LZ-E029264 |
| 英文名称 |
Human Pro-Nerve growth factor,proNGF ELISA kit |
规格 |
48T/96T |
| 用途 |
仅供科研实验 |
品牌 |
联祖 |
主要产品性能参数
特异性:试剂盒具有高特异性,能识别人源proNGF蛋白,与成熟形式的神经生长因子(NGF)及其他神经营养因子无明显交叉反应。
重复性:用于衡量检测结果的稳定性。通常以变异系数(CV)表示,板内和板间变异系数一般均小于10%或15%。
灵敏度:指试剂盒能够检测到的最低proNGF蛋白浓度。不同试剂盒的灵敏度不同,例如,有的产品灵敏度可低至 < 10 pg/mL。
检测范围:指试剂盒能够准确定量的浓度区间。例如,标准品的浓度范围可能为 15.6 pg/mL 至 1000 pg/mL。
ELISA试剂盒的局限性与缺点
1. 操作步骤繁琐,对操作要求高
流程长:典型的ELISA实验涉及加样、多次孵育、多次洗涤、显色、终止等步骤,耗时较长(通常需要3-5小时甚至过夜)。
洗涤关键:洗涤步骤至关重要,洗板不彻底会导致背景值过高(假阳性),洗板过度或干涸则影响灵敏度。这对操作人员的细心程度有一定要求。
2. 易受干扰与“钩状效应”
钩状效应 (Hook Effect):当样本中目标抗原浓度极高时,可能会饱和捕获抗体和检测抗体,导致信号反而下降,出现假阴性结果。这需要对高浓度样本进行稀释复测。
基质干扰:样本中的杂质(如溶血、脂血、类风湿因子等)可能会干扰抗原抗体结合,导致结果偏差。
交叉反应:虽然特异性较高,但如果抗体质量不佳,仍可能与结构相似的分子发生交叉反应。
3. 仅检测抗原含量,信息有限
ELISA只能告诉你“有多少”抗原,无法提供关于抗原的生物活性(是否具有功能)或结构完整性的信息。例如,变性的蛋白可能仍能被ELISA检测,但已失去生物活性。
4. 试剂成本与稳定性
试剂成本:高质量的抗体(尤其是配对良好的单抗)制备工艺复杂,导致试剂盒成本相对较高。
酶的不稳定性:酶标记物对温度和环境敏感,若保存不当容易失活,影响实验结果。
公司正在出售的产品
| 细胞去甲基化处理试剂盒 |
冰冻切片组织CASPASE-7蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒 |
| PDGF-A蛋白表达西方杂交分析试剂盒 |
蛋白体复合物制备试剂盒 |
| 细胞半胱-8(CASPASE-8)活性比色法定量检测试剂盒 |
细胞CASEIN KINASE 1δ激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C) |
| 通用型亚硝酸盐荧光定量检测试剂盒 |
细胞HCV(HEPATITIS VIRUS C)病毒定量PCR扩增检测试剂盒 |
| 链霉菌属基因组DNA纯化试剂盒 |
细胞溶酶体型酸性磷酸酶活性荧光定量检测试剂盒 |
| 单线态氧气清除(scavenging)活性比色法筛选试剂盒 |
蛋白激酶系列高通量筛选荧光检测试剂盒 |
| 热休克蛋白-70单克隆抗体 |
黄体激素释放激素类似物/促性腺激素释放激素抗体 |
| Pacific Blue标记人CD57单克隆抗体 |
富含亮氨酸重复结构域蛋白6抗体 |
| 肿瘤/睾丸抗原38抗体 |
血管内皮生长因子B167 |
| 40S核糖体蛋白S5抗体 |
跨膜γ羧基酸蛋白2抗体 |
| TENT5A蛋白抗体 |
G蛋白偶联受体152抗体 |
| 丝裂原活化蛋白激酶15抗体 |
DNA损伤关卡蛋白1抗体 |
| 小鼠去甲肾上腺素(NA)ELISA试剂盒 |
人神经生长因子前体(proNGF)ELISA试剂盒小鼠去甲肾上腺素(NA)ELISA试剂盒 |
| 人神经丝蛋白L(NF-L)ELISA试剂盒 |
人γ谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-ECS)ELISA试剂盒 |
注意事项
样本要求:溶血的标本会影响检测结果,不宜使用。待测样本应尽早检测,如需保存,应在-20℃或-80℃冷冻,并避免反复冻融。
试剂准备:使用前需将所有试剂置于室温(20-25℃)平衡。浓缩洗涤液若有晶体析出,需在37℃下加热至完全溶解后再稀释使用。
操作规范:
为避免交叉污染,添加每个标准品、样品和试剂时应更换移液器枪头。
底物显色液应呈无色或很浅的颜色,若已变蓝则不能使用。
洗板步骤对结果准确性至关重要,无论是手动还是自动洗板,都应确保洗涤充分,并避免微孔在温育过程中干燥。
任何反应试剂不能接触漂白溶剂或其散发的强烈气体。