人神经丝蛋白(NF)ELISA试剂盒
检测原理:
人NF ELISA试剂盒(通常检测NF-L或总NF)采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验。其核心逻辑是利用两种特异性抗体“夹住”样本中的神经丝蛋白抗原,通过显色反应定量,颜色深浅与浓度成正比。
包被:酶标板上预包被了针对人神经丝蛋白(NF)的特异性捕获抗体。
加样与结合:
往包被的微孔中加入待测样本(血清、血浆、脑脊液、组织匀浆等)和酶标检测抗体(通常是HRP标记的抗NF抗体)。
样本中的NF抗原会同时与固相上的捕获抗体和液相中的酶标抗体结合,形成“抗体-抗原-酶标抗体”的复合物(即“三明治”结构)。
洗板:洗去未结合的游离成分。
显色:加入底物溶液(如TMB)。TMB在辣根过氧化物酶(HRP)的催化下转化成蓝色。
终止与测定:加入终止液(酸性溶液),颜色由蓝变黄。颜色的深浅与样本中NF的浓度呈正相关。
产品名称:
人神经丝蛋白(NF)ELISA试剂盒
英文名称:Human neurofilament protein,NF ELISA Kit
规格:48T/96T
货号:LZ-E029262
用途:仅供科研研究实验
核心参数概览:
检测类型 双抗体夹心法 (Sandwich ELISA)
检测范围 10 - 350 ng/L (即 10-350 pg/mL,具体视品牌而定)
灵敏度 < 1.0 ng/L (即 < 1.0 pg/mL,高敏试剂盒可达此水平)
特异性 针对人神经丝蛋白(通常特异性识别NF-L或NF-H),与其他结构类似物无明显交叉反应
重复性 板内变异系数 (CV) < 10%;板间变异系数 (CV) < 12-15%
适用样本 血清、血浆、脑脊液 (CSF)、组织匀浆液、细胞培养上清液
适用样本类型:
该试剂盒适用于多种生物样本,主要包括:
血清
血浆(如EDTA、肝素抗凝)
细胞培养上清液
组织匀浆
细胞裂解液
检测流程简要:
一、试剂平衡:将试剂盒各组分于室温放置20分钟,恢复至常温。
二、加样:设空白孔、标准品孔(梯度浓度)、待测样本孔,每孔加入50μL样本或标准品。
三、孵育结合:每孔再加入HRP标记抗体100μL,37℃避光温育60分钟。
四、洗涤:弃液后用洗涤液洗板5次,拍干。
五、显色:每孔加TMB显色液A、B各50μL,37℃避光反应15分钟。
六、终止:每孔加50μL终止液,颜色由蓝转黄。
七、读数:15分钟内于450nm测定OD值,绘制标准曲线并计算浓度。
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注意事项:
样本要求:溶血的标本会影响检测结果,不宜使用。待测样本应尽早检测,如需保存,应在-20℃或-80℃冷冻,并避免反复冻融。
试剂准备:使用前需将所有试剂置于室温(20-25℃)平衡。浓缩洗涤液若有晶体析出,需在37℃下加热至完全溶解后再稀释使用。
操作规范:
为避免交叉污染,添加每个标准品、样品和试剂时应更换移液器枪头。
底物显色液应呈无色或很浅的颜色,若已变蓝则不能使用。
洗板步骤对结果准确性至关重要,无论是手动还是自动洗板,都应确保洗涤充分,并避免微孔在温育过程中干燥。
任何反应试剂不能接触漂白溶剂或其散发的强烈气体。
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