人肾病蛋白(nephrin)ELISA试剂盒
检测原理:
包被与捕获:试剂盒的微孔板上预先包被了能特异性结合人Nephrin蛋白的捕获抗体。
抗原抗体反应:向微孔中依次加入待测样本(如血清、血浆、尿液、细胞培养上清、组织匀浆等)和辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体。样本中的Nephrin蛋白(抗原)会同时与包被的捕获抗体和HRP标记的检测抗体结合,形成一个“抗体-抗原-抗体”的夹心复合物,并固定在微孔板上。
洗涤:通过洗涤步骤,去除未结合的游离物质。
显色反应:加入底物TMB(3,3',5,5'-四甲基联苯胺)。在HRP的催化下,TMB由无色变为蓝色。
终止与检测:加入终止液(通常为硫酸)后,反应终止,溶液颜色由蓝色变为黄色。颜色的深浅与样本中Nephrin蛋白的浓度呈正相关。最后,使用酶标仪在450nm波长下测定各孔的吸光度(OD值),通过标准曲线计算出样本中Nephrin的浓度。
产品名称:
人肾病蛋白(nephrin)ELISA试剂盒
英文名称:Human Nephrin ELISA Kit
规格:48T/96T
货号:LZ-E029244
用途:仅供科研研究实验
核心参数概览:
特异性:试剂盒具有高特异性,能识别人源Nephrin蛋白,与其他足细胞蛋白或肾蛋白无明显交叉反应。
重复性:用于衡量检测结果的稳定性。通常以变异系数(CV)表示,板内和板间变异系数一般均小于10%或15%。
灵敏度:指试剂盒能够检测到的最低Nephrin蛋白浓度。不同试剂盒的灵敏度不同,例如,有的产品灵敏度可低至 0.094 ng/mL 或 0.15625 ng/mL。
检测范围:指试剂盒能够准确定量的浓度区间。例如,标准品的浓度范围可能为 0.156 ng/mL 至 10 ng/mL 或 0.3125
适用样本类型:
该试剂盒适用于多种生物样本,主要包括:
血清
血浆(如EDTA、肝素抗凝)
细胞培养上清液
组织匀浆
细胞裂解液
检测流程简要:
一、试剂平衡:将试剂盒各组分于室温放置20分钟,恢复至常温。
二、加样:设空白孔、标准品孔(梯度浓度)、待测样本孔,每孔加入50μL样本或标准品。
三、孵育结合:每孔再加入HRP标记抗体100μL,37℃避光温育60分钟。
四、洗涤:弃液后用洗涤液洗板5次,拍干。
五、显色:每孔加TMB显色液A、B各50μL,37℃避光反应15分钟。
六、终止:每孔加50μL终止液,颜色由蓝转黄。
七、读数:15分钟内于450nm测定OD值,绘制标准曲线并计算浓度。
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注意事项:
样本要求:溶血的标本会影响检测结果,不宜使用。待测样本应尽早检测,如需保存,应在-20℃或-80℃冷冻,并避免反复冻融。
试剂准备:使用前需将所有试剂置于室温(20-25℃)平衡。浓缩洗涤液若有晶体析出,需在37℃下加热至完全溶解后再稀释使用。
操作规范:
为避免交叉污染,添加每个标准品、样品和试剂时应更换移液器枪头。
底物显色液应呈无色或很浅的颜色,若已变蓝则不能使用。
洗板步骤对结果准确性至关重要,无论是手动还是自动洗板,都应确保洗涤充分,并避免微孔在温育过程中干燥。
任何反应试剂不能接触漂白溶剂或其散发的强烈气体。
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