根据试剂盒的设计不同,主要有两种检测原理。目前科研中常用的是双抗体夹心法。
双抗体夹心法(常见)
这是利用两种特异性抗体“夹住”样本中的OX-B分子。
包被:酶标板上预包被了针对人OX-B的特异性捕获抗体。
加样与结合:
往包被的微孔中加入待测样本(血清、血浆、脑脊液、细胞培养上清等)和酶标检测抗体(HRP标记的抗OX-B抗体)。
样本中的OX-B抗原同时与固相捕获抗体和酶标抗体结合,形成“抗体-抗原-酶标抗体”复合物。
洗板:洗去未结合的游离成分。
显色与测定:
加入TMB底物溶液。TMB在HRP催化下变蓝,加入终止液后变黄。
结果判定:颜色的深浅与样本中OX-B的浓度呈正相关。
产品属性
| 产品名称 |
人食欲素/阿立新B(OX-B)ELISA试剂盒 |
货号 |
LZ-E029222 |
| 英文名称 |
Human Orexin B,OX-B ELISA Kit |
规格 |
48T/96T |
| 用途 |
仅供科研实验 |
品牌 |
联祖 |
主要产品性能参数
参数项目 指标详情
检测类型 双抗体夹心法 或 竞争法
检测范围 需咨询厂家(通常为 pg/mL 级别,部分高敏试剂盒可达 10 pg/mL 以下)
灵敏度 需咨询厂家(通常具有高灵敏度,最低检测限低)
特异性 针对人OX-B,与OX-A(食欲素A)及其他神经肽无明显交叉反应
重复性 板内变异系数 (CV) < 10%;板间变异系数 (CV) < 12%
适用样本 血清、血浆、脑脊液、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液
ELISA试剂盒的局限性与缺点
1. 操作步骤繁琐,对操作要求高
流程长:典型的ELISA实验涉及加样、多次孵育、多次洗涤、显色、终止等步骤,耗时较长(通常需要3-5小时甚至过夜)。
洗涤关键:洗涤步骤至关重要,洗板不彻底会导致背景值过高(假阳性),洗板过度或干涸则影响灵敏度。这对操作人员的细心程度有一定要求。
2. 易受干扰与“钩状效应”
钩状效应 (Hook Effect):当样本中目标抗原浓度极高时,可能会饱和捕获抗体和检测抗体,导致信号反而下降,出现假阴性结果。这需要对高浓度样本进行稀释复测。
基质干扰:样本中的杂质(如溶血、脂血、类风湿因子等)可能会干扰抗原抗体结合,导致结果偏差。
交叉反应:虽然特异性较高,但如果抗体质量不佳,仍可能与结构相似的分子发生交叉反应。
3. 仅检测抗原含量,信息有限
ELISA只能告诉你“有多少”抗原,无法提供关于抗原的生物活性(是否具有功能)或结构完整性的信息。例如,变性的蛋白可能仍能被ELISA检测,但已失去生物活性。
4. 试剂成本与稳定性
试剂成本:高质量的抗体(尤其是配对良好的单抗)制备工艺复杂,导致试剂盒成本相对较高。
酶的不稳定性:酶标记物对温度和环境敏感,若保存不当容易失活,影响实验结果。
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| 人视黄酸ELISA试剂盒 |
人β淀粉样前体蛋白(β-APP)ELISA试剂盒 |
注意事项
样本要求:溶血的标本会影响检测结果,不宜使用。待测样本应尽早检测,如需保存,应在-20℃或-80℃冷冻,并避免反复冻融。
试剂准备:使用前需将所有试剂置于室温(20-25℃)平衡。浓缩洗涤液若有晶体析出,需在37℃下加热至完全溶解后再稀释使用。
操作规范:
为避免交叉污染,添加每个标准品、样品和试剂时应更换移液器枪头。
底物显色液应呈无色或很浅的颜色,若已变蓝则不能使用。
洗板步骤对结果准确性至关重要,无论是手动还是自动洗板,都应确保洗涤充分,并避免微孔在温育过程中干燥。
任何反应试剂不能接触漂白溶剂或其散发的强烈气体。