人水通道蛋白3(AQP-3)ELISA试剂盒
检测原理:
人AQP-3 ELISA试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验。其核心逻辑是利用两种特异性抗体“夹住”样本中的AQP-3抗原,通过显色反应定量,颜色深浅与浓度成正比。
包被:酶标板上预包被了针对人AQP-3的特异性捕获抗体(通常是抗人AQP-3单克隆抗体)。
加样与结合:
往包被的微孔中加入待测样本(血清、血浆、细胞培养上清、组织匀浆等)和酶标检测抗体(通常是HRP标记的抗AQP-3抗体,部分试剂盒可能使用生物素化抗体+亲和素-HRP系统)。
样本中的AQP-3抗原会同时与固相上的捕获抗体和液相中的酶标抗体结合,形成“抗体-抗原-酶标抗体”的复合物(即“三明治”结构)。
洗板:洗去未结合的游离成分。
显色:加入底物溶液(如TMB)。TMB在辣根过氧化物酶(HRP)的催化下转化成蓝色。
终止与测定:加入终止液(酸性溶液),颜色由蓝变黄。颜色的深浅与样本中AQP-3的浓度呈正相关。
产品名称:
人水通道蛋白3(AQP-3)ELISA试剂盒
英文名称:Human Aquaporin 3,AQP-3 ELISA Kit
规格:48T/96T
货号:LZ-E029190
用途:仅供科研研究实验
核心参数概览:
检测类型 双抗体夹心法 (Sandwich ELISA)
检测范围 0.312 - 20 ng/mL (常见范围,部分高敏试剂盒可达 25-800 pg/mL)
灵敏度 0.16 - 0.188 ng/mL (或 < 1 pg/mL,视具体品牌而定)
特异性 针对人AQP-3,与其他水通道蛋白(如AQP-1, AQP-2)无明显交叉反应
重复性 板内变异系数 (CV) < 10%;板间变异系数 (CV) < 12%
适用样本 血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、唾液、尿液
样本处理要求:
1、血清:全血室温静置2小时或4℃过夜,1000×g离心20分钟取上清;可暂存于-20℃或-80℃,避免反复冻融
2、血浆:推荐使用EDTA或肝素抗凝管采集,采样后30分钟内于2–8℃、1000×g离心15分钟,取上清检测
3、组织匀浆:用预冷PBS冲洗组织去除残留血液,按1:9(重量:体积)比例加入含蛋白酶抑制剂的PBS进行研磨,超声或反复冻融辅助裂解后,5000×g离心5–10分钟取上清
检测流程简要:
一、试剂平衡:将试剂盒各组分于室温放置20分钟,恢复至常温。
二、加样:设空白孔、标准品孔(梯度浓度)、待测样本孔,每孔加入50μL样本或标准品。
三、孵育结合:每孔再加入HRP标记抗体100μL,37℃避光温育60分钟。
四、洗涤:弃液后用洗涤液洗板5次,拍干。
五、显色:每孔加TMB显色液A、B各50μL,37℃避光反应15分钟。
六、终止:每孔加50μL终止液,颜色由蓝转黄。
七、读数:15分钟内于450nm测定OD值,绘制标准曲线并计算浓度。
注意事项:
1. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。样本在使用前也要在室温平衡60分钟。
2. 浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3. 各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4. 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6. 底物请避光保存。
7. 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8. 所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9. 本试剂不同批号组分不得混用。
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