人丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶PAK4试剂盒
检测原理:
固相抗体包被:试剂盒的酶标板微孔中预先包被了能特异性识别人PAK4的抗体(捕获抗体)。
抗原-抗体反应:向微孔中依次加入样本(如血清、血浆、组织匀浆、细胞培养上清等)和酶标记的检测抗体(如HRP标记的抗体或生物素标记的抗体)。样本中的PAK4抗原会同时与固相抗体和酶标检测抗体结合,形成“固相抗体-抗原-酶标抗体”的三明治夹心复合物。
洗涤:通过洗涤步骤,去除未与复合物结合的其他物质。
显色反应:加入底物溶液(通常是TMB)。在酶的催化下,无色的TMB底物会转化为蓝色。
终止与测定:加入终止液(如硫酸)终止反应,溶液颜色由蓝色变为黄色。颜色的深浅与样本中PAK4的浓度呈正相关。使用酶标仪在450nm波长下测定各孔的吸光度(OD值),通过标准曲线即可计算出样本中PAK4的浓度。
产品名称:
人丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶PAK4试剂盒
英文名称:Human Serine/threonine-protein kinase PAK 4,PAK4 ELISA kit
规格:48T/96T
货号:LZ-E029183
用途:仅供科研研究实验
核心参数概览:
以下是人丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶PAK4(PAK4)ELISA试剂盒的一些通用技术参数,具体数值因不同品牌和产品而异,请以产品说明书为准。
参数类别 具体说明
检测方法 双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)
检测样本 血清、血浆、组织匀浆、细胞培养上清及相关液体样本
检测波长 450nm
特异性 可检测天然及重组人PAK4,不与其它可溶性结构类似物发生交叉反应
重复性 板内、板间变异系数(CV)通常小于10%-15%
准确性 标准品线性回归与预期浓度的相关系数R值,通常≥0.9900
适用样本类型:
该试剂盒适用于多种生物样本,主要包括:
血清
血浆(如EDTA、肝素抗凝)
细胞培养上清液
组织匀浆
细胞裂解液
检测流程简要:
一、试剂平衡:将试剂盒各组分于室温放置20分钟,恢复至常温。
二、加样:设空白孔、标准品孔(梯度浓度)、待测样本孔,每孔加入50μL样本或标准品。
三、孵育结合:每孔再加入HRP标记抗体100μL,37℃避光温育60分钟。
四、洗涤:弃液后用洗涤液洗板5次,拍干。
五、显色:每孔加TMB显色液A、B各50μL,37℃避光反应15分钟。
六、终止:每孔加50μL终止液,颜色由蓝转黄。
七、读数:15分钟内于450nm测定OD值,绘制标准曲线并计算浓度。
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注意事项:
样本要求:溶血的标本会影响检测结果,不宜使用。待测样本应尽早检测,如需保存,应在-20℃或-80℃冷冻,并避免反复冻融。
试剂准备:使用前需将所有试剂置于室温(20-25℃)平衡。浓缩洗涤液若有晶体析出,需在37℃下加热至完全溶解后再稀释使用。
操作规范:
为避免交叉污染,添加每个标准品、样品和试剂时应更换移液器枪头。
底物显色液应呈无色或很浅的颜色,若已变蓝则不能使用。
洗板步骤对结果准确性至关重要,无论是手动还是自动洗板,都应确保洗涤充分,并避免微孔在温育过程中干燥。
任何反应试剂不能接触漂白溶剂或其散发的强烈气体。
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