人丝虫病抗体(IgG4)ELISA试剂盒
检测原理:
包被抗原:试剂盒的微孔板上预先包被了纯化的丝虫特异性抗原。
抗原抗体反应:向微孔中加入待测样本(如血清、血浆或滤纸干血样)。如果样本中存在丝虫特异性的IgG4抗体,它会与板上的丝虫抗原特异性结合。
加入酶标二抗:洗涤去除未结合的物质后,加入辣根过氧化物酶(HRP)或碱性磷酸酶(AP)标记的抗人IgG4单克隆抗体(二抗)。该二抗会与已结合在板上的IgG4抗体结合。
显色反应:再次洗涤后,加入相应的底物溶液(如TMB或pNPP)。在酶的催化下,底物发生显色反应。
终止与检测:加入终止液后,反应终止。使用酶标仪在特定波长(如405nm或450nm)下测定各孔的吸光度(OD值)。颜色的深浅与样本中丝虫特异性IgG4抗体的浓度呈正相关。
产品名称:
人丝虫病抗体(IgG4)ELISA试剂盒
英文名称:Human filariasis(philariasis)antibody IgG4 ELISA kit
规格:48T/96T
货号:LZ-E029176
用途:仅供科研研究实验
核心参数概览:
特异性:试剂盒具有很高的特异性,能准确识别人源丝虫特异性IgG4抗体,与血吸虫病、并殖吸虫病、华支睾吸虫病等其他寄生虫感染血清无交叉反应。
重复性:用于衡量检测结果的稳定性。通常以变异系数(CV)表示,板内和板间变异系数一般均小于15%。
灵敏度:指试剂盒能够检测到的最低抗体水平。有研究显示,其对阳性血清的符合率(敏感度)可达 94.17% 以上,即使对于保存了20余年的冻存血清也能有效检出。
判断标准:通常以阴性对照平均OD值的2.1倍作为临界值(Cut-off值)。
样本OD值 ≥ Cut-off值,
检测流程简要:
第一阶段:准备工作 (Pre-preparation)
试剂回温:从冰箱取出试剂盒,将所有试剂(包括浓缩洗涤液、标准品、样本等)在室温(20-25℃)下平衡至少 30分钟。
注意:如果浓缩洗涤液有结晶,需置于37℃水浴助溶并混匀。
标准品稀释:按照说明书要求,使用专用稀释液对标准品进行梯度稀释(通常做7-8个浓度点),现配现用。
样本处理:确保血清、血浆或细胞上清液澄清无沉淀(如有沉淀需再次离心)。
第二阶段:加样与孵育
加样:
在酶标板的对应孔中,分别加入 100 µL(具体体积看说明书)稀释好的标准品和待测样本。
设置空白孔(只加稀释液)。
建议:每个样本做2-3个复孔,数据更可靠。
孵育:
盖上封板膜,放入 37℃ 恒温箱孵育 1-2小时(或按说明书要求,如室温2小时)。
原理:让样本中的抗原与板上的捕获抗体结合。
第三阶段:洗板与检测抗体
洗板(关键步骤):
弃去孔内液体,每孔加满洗涤液(约300-350 µL),静置浸泡 30-60秒 后甩干。
重复洗涤 3-5次。最后一次需在吸水纸上用力拍干,确保无残留液体。
加检测抗体:
每孔加入 100 µL 稀释好的检测抗体工作液(生物素化抗体)。
盖上封板膜,37℃ 孵育 1小时。
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注意事项:
标准曲线:每次实验都必须重新制作标准曲线,不可沿用旧数据。
洗涤步骤:洗涤不充分是导致误差的主要原因,需严格按照说明书洗板(通常3-5次)。
用途限制:此类试剂盒通常仅供科研使用,不可用于临床诊断
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