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| 销售商： 上海联祖生物科技有限公司 | 查看该公司所有产品 >> |
检测原理
1. 双抗体夹心法
包被与捕获：微孔板预先包被了特异性识别人BH4的捕获抗体。
抗原结合：加入待测样本（如血清、血浆、组织匀浆等），样本中的BH4抗原与固相抗体结合。
形成夹心复合物：洗涤后，加入酶（如辣根过氧化物酶HRP）标记的检测抗体，与已捕获的BH4结合，形成“固相抗体-BH4抗原-酶标抗体”复合物。
显色与检测：加入TMB底物显色（蓝色），加终止液后变黄色。颜色深浅与样本中BH4浓度呈正相关。在450nm波长下测定OD值，通过标准曲线计算浓度。
2. 竞争法
包被与竞争：微孔板预先包被了抗BH4抗体。将待测样本（含未标记BH4）与酶（HRP）标记的BH4同时加入孔中。
竞争性结合：样本中的未标记BH4与酶标记的BH4竞争结合固相抗体的有限位点。
显色与检测：洗涤后，加入TMB底物显色。样本中BH4浓度越高，结合到板上的酶标记BH4就越少，显色越浅。颜色深浅与样本中BH4浓度呈反比。在450nm波长下测定OD值，通过标准曲线计算浓度。
产品属性
主要产品性能参数
不同厂家和不同原理的试剂盒参数差异较大，以下是常见的参数参考：
检测方法：双抗体夹心法 或 竞争法
检测范围：
夹心法示例：6.25 - 100 pg/mL
竞争法示例：1.0 - 100 ng/mL
灵敏度：
夹心法示例：0.1 pg/mL
竞争法示例：1.0 ng/mL
包被与捕获：微孔板预先包被了特异性识别人BH4的捕获抗体。
抗原结合：加入待测样本（如血清、血浆、组织匀浆等），样本中的BH4抗原与固相抗体结合。
形成夹心复合物：洗涤后，加入酶（如辣根过氧化物酶HRP）标记的检测抗体，与已捕获的BH4结合，形成“固相抗体-BH4抗原-酶标抗体”复合物。
显色与检测：加入TMB底物显色（蓝色），加终止液后变黄色。颜色深浅与样本中BH4浓度呈正相关。在450nm波长下测定OD值，通过标准曲线计算浓度。
2. 竞争法
包被与竞争：微孔板预先包被了抗BH4抗体。将待测样本（含未标记BH4）与酶（HRP）标记的BH4同时加入孔中。
竞争性结合：样本中的未标记BH4与酶标记的BH4竞争结合固相抗体的有限位点。
显色与检测：洗涤后，加入TMB底物显色。样本中BH4浓度越高，结合到板上的酶标记BH4就越少，显色越浅。颜色深浅与样本中BH4浓度呈反比。在450nm波长下测定OD值，通过标准曲线计算浓度。
产品属性
| 产品名称 | 人四氢生物蝶呤(BH4)ELISA试剂盒 | 货号 | LZ-E029169 |
| 英文名称 | Human tetrahydrobiopterin,BH4 ELISA Kit | 规格 | 48T/96T |
| 用途 | 仅供科研实验 | 品牌 | 联祖 |
检测方法：双抗体夹心法 或 竞争法
检测范围：
夹心法示例：6.25 - 100 pg/mL
竞争法示例：1.0 - 100 ng/mL
灵敏度：
夹心法示例：0.1 pg/mL
竞争法示例：1.0 ng/mL
ELISA试剂盒实验
第一阶段：准备工作 (Pre-preparation)
试剂回温：从冰箱取出试剂盒，将所有试剂（包括浓缩洗涤液、标准品、样本等）在室温（20-25℃）下平衡至少 30分钟。
注意：如果浓缩洗涤液有结晶，需置于37℃水浴助溶并混匀。
标准品稀释：按照说明书要求，使用专用稀释液对标准品进行梯度稀释（通常做7-8个浓度点），现配现用。
样本处理：确保血清、血浆或细胞上清液澄清无沉淀（如有沉淀需再次离心）。
第二阶段：加样与孵育
加样：
在酶标板的对应孔中，分别加入 100 µL（具体体积看说明书）稀释好的标准品和待测样本。
设置空白孔（只加稀释液）。
建议：每个样本做2-3个复孔，数据更可靠。
孵育：
盖上封板膜，放入 37℃ 恒温箱孵育 1-2小时（或按说明书要求，如室温2小时）。
原理：让样本中的抗原与板上的捕获抗体结合。
第三阶段：洗板与检测抗体
洗板（关键步骤）：
弃去孔内液体，每孔加满洗涤液（约300-350 µL），静置浸泡 30-60秒 后甩干。
重复洗涤 3-5次。最后一次需在吸水纸上用力拍干，确保无残留液体。
加检测抗体：
每孔加入 100 µL 稀释好的检测抗体工作液（生物素化抗体）。
盖上封板膜，37℃ 孵育 1小时。
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ELISA试剂盒性能指标速查表
性能指标 关键参数 优质标准参考 意义
灵敏度 最低检测限 (LoD) 数值越低越好 能否测出微量样本
特异性 交叉反应率 < 5% (越低越好) 是否只测目标物，不误判
精密度 变异系数 (CV) 批内 < 10%, 批间 < 15% 结果是否稳定、可重复
准确性 回收率 80% - 120% 结果是否接近真实值
线性范围 标准曲线区间 覆盖样本预期浓度 能否准确定量高低浓度
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