人酸性神经鞘磷脂酶(ASM)ELISA试剂盒
检测原理:
固相抗体包被:试剂盒的酶标板微孔中预先包被了能特异性识别人ASM的抗体(捕获抗体)。
抗原-抗体反应:向微孔中依次加入样本(如血清、血浆、组织匀浆、细胞培养上清等)和辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体。样本中的ASM抗原会同时与固相抗体和酶标检测抗体结合,形成“固相抗体-抗原-酶标抗体”的三明治夹心复合物。
洗涤:通过洗涤步骤,去除未与复合物结合的其他物质。
显色反应:加入底物溶液(通常是TMB)。在HRP的催化下,无色的TMB底物会转化为蓝色。
终止与测定:加入终止液(如硫酸)终止反应,溶液颜色由蓝色变为黄色。颜色的深浅与样本中ASM的浓度呈正相关。使用酶标仪在450nm波长下测定各孔的吸光度(OD值),通过标准曲线即可计算出样本中ASM的浓度。
产品名称:
人酸性神经鞘磷脂酶(ASM)ELISA试剂盒
英文名称:Human acid sphingomyelinase, ASM ELISA Kit
规格:48T/96T
货号:LZ-E029163
用途:仅供科研研究实验
核心参数概览:
以下是人酸性神经鞘磷脂酶(ASM)ELISA试剂盒的一些通用技术参数,具体数值因不同品牌和产品而异,请以产品说明书为准。
参数类别 具体说明
检测方法 双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)
检测样本 血清、血浆、组织匀浆、细胞培养上清及相关液体样本
检测波长 450nm
特异性 可检测天然及重组人ASM,不与其它相关蛋白发生交叉反应
重复性 板内、板间变异系数(CV)通常小于10%
准确性 标准品线性回归与预期浓度的相关系数R值,通常≥0.9900
检测流程简要:
第一阶段:准备工作 (Pre-preparation)
试剂回温:从冰箱取出试剂盒,将所有试剂(包括浓缩洗涤液、标准品、样本等)在室温(20-25℃)下平衡至少 30分钟。
注意:如果浓缩洗涤液有结晶,需置于37℃水浴助溶并混匀。
标准品稀释:按照说明书要求,使用专用稀释液对标准品进行梯度稀释(通常做7-8个浓度点),现配现用。
样本处理:确保血清、血浆或细胞上清液澄清无沉淀(如有沉淀需再次离心)。
第二阶段:加样与孵育
加样:
在酶标板的对应孔中,分别加入 100 µL(具体体积看说明书)稀释好的标准品和待测样本。
设置空白孔(只加稀释液)。
建议:每个样本做2-3个复孔,数据更可靠。
孵育:
盖上封板膜,放入 37℃ 恒温箱孵育 1-2小时(或按说明书要求,如室温2小时)。
原理:让样本中的抗原与板上的捕获抗体结合。
第三阶段:洗板与检测抗体
洗板(关键步骤):
弃去孔内液体,每孔加满洗涤液(约300-350 µL),静置浸泡 30-60秒 后甩干。
重复洗涤 3-5次。最后一次需在吸水纸上用力拍干,确保无残留液体。
加检测抗体:
每孔加入 100 µL 稀释好的检测抗体工作液(生物素化抗体)。
盖上封板膜,37℃ 孵育 1小时。
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注意事项:
标准曲线:每次实验都必须重新制作标准曲线,不可沿用旧数据。
洗涤步骤:洗涤不充分是导致误差的主要原因,需严格按照说明书洗板(通常3-5次)。
用途限制:此类试剂盒通常仅供科研使用,不可用于临床诊断
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