包被与捕获:试剂盒的微孔板预先包被了能特异性识别人HPL的捕获抗体。
抗原结合:向微孔中加入待测样本(如血清、血浆),样本中的HPL抗原会与固相上的捕获抗体结合。
形成夹心复合物:洗涤后,加入酶(如辣根过氧化物酶HRP)标记的抗HPL检测抗体,它会与已被捕获的HPL结合,形成“固相捕获抗体-HPL抗原-酶标检测抗体”的夹心复合物。
显色与检测:再次洗涤并加入TMB底物溶液,酶催化TMB显色(蓝色),加入终止液后变为黄色。颜色的深浅与样本中HPL的浓度呈正相关。最后,使用酶标仪在450nm波长下测定各孔的吸光度(OD值),通过绘制标准曲线即可计算出样本中HPL的浓度。
产品属性
| 产品名称 |
人胎盘催乳素(HPL)ELISA试剂盒 |
货号 |
LZ-E029141 |
| 英文名称 |
Human placenta lactogen, |
规格 |
48T/96T |
| 用途 |
仅供科研实验 |
品牌 |
联祖 |
主要产品性能参数
检测方法:双抗体夹心法
检测范围:不同试剂盒的检测范围差异较大,例如 1.25 - 20 mg/L (或 µg/mL)。
灵敏度:通常小于 1.25 mg/L。
精密度:
批内变异系数(CV):通常小于 10%
批间变异系数(CV):通常小于 12%
ELISA试剂盒实验
第一阶段:准备工作 (Pre-preparation)
试剂回温:从冰箱取出试剂盒,将所有试剂(包括浓缩洗涤液、标准品、样本等)在室温(20-25℃)下平衡至少 30分钟。
注意:如果浓缩洗涤液有结晶,需置于37℃水浴助溶并混匀。
标准品稀释:按照说明书要求,使用专用稀释液对标准品进行梯度稀释(通常做7-8个浓度点),现配现用。
样本处理:确保血清、血浆或细胞上清液澄清无沉淀(如有沉淀需再次离心)。
第二阶段:加样与孵育
加样:
在酶标板的对应孔中,分别加入 100 µL(具体体积看说明书)稀释好的标准品和待测样本。
设置空白孔(只加稀释液)。
建议:每个样本做2-3个复孔,数据更可靠。
孵育:
盖上封板膜,放入 37℃ 恒温箱孵育 1-2小时(或按说明书要求,如室温2小时)。
原理:让样本中的抗原与板上的捕获抗体结合。
第三阶段:洗板与检测抗体
洗板(关键步骤):
弃去孔内液体,每孔加满洗涤液(约300-350 µL),静置浸泡 30-60秒 后甩干。
重复洗涤 3-5次。最后一次需在吸水纸上用力拍干,确保无残留液体。
加检测抗体:
每孔加入 100 µL 稀释好的检测抗体工作液(生物素化抗体)。
盖上封板膜,37℃ 孵育 1小时。
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ELISA试剂盒性能指标速查表
性能指标 关键参数 优质标准参考 意义
灵敏度 最低检测限 (LoD) 数值越低越好 能否测出微量样本
特异性 交叉反应率 < 5% (越低越好) 是否只测目标物,不误判
精密度 变异系数 (CV) 批内 < 10%, 批间 < 15% 结果是否稳定、可重复
准确性 回收率 80% - 120% 结果是否接近真实值
线性范围 标准曲线区间 覆盖样本预期浓度 能否准确定量高低浓度