人糖基化依赖的细胞黏附分子试剂盒
检测原理:
人 GlyCAM-1 ELISA 试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验。其核心逻辑是利用两种特异性抗体“夹住”样本中的 GlyCAM-1 抗原,颜色深浅与浓度成正比。
包被:酶标板上预包被了针对人 GlyCAM-1 的特异性捕获抗体(通常是抗 GlyCAM-1 单抗)。
加样与结合:
往包被的微孔中加入待测样本(血清、血浆、细胞培养上清等)和酶标检测抗体(通常是 HRP 标记的抗 GlyCAM-1 抗体)。
样本中的 GlyCAM-1 抗原会同时与固相上的捕获抗体和液相中的酶标抗体结合,形成“抗体-抗原-酶标抗体”的复合物(即“三明治”结构)。
洗板:洗去未结合的游离成分。
显色:加入底物溶液(如 TMB)。TMB 在辣根过氧化物酶(HRP)的催化下转化成蓝色。
终止与测定:加入终止液(酸性溶液),颜色由蓝变黄。颜色的深浅与样本中 GlyCAM-1 的浓度呈正相关。
产品名称:
人糖基化依赖的细胞黏附分子(GlyCAM-1)ELISA试剂盒
英文名称:Human glycosylation-dependent cell adhesion molecule-1,GlyCAM-1 ELISA Kit
规格:48T/96T
货号:LZ-E029114
用途:仅供科研研究实验
核心参数概览:
检测类型 双抗体夹心法 (Sandwich ELISA)
检测范围 需咨询厂家(通常为 pg/mL 或 ng/mL 级别)
灵敏度 需咨询厂家(通常具有高灵敏度)
特异性 针对人 GlyCAM-1,与其他相关蛋白无明显交叉反应
重复性 板内变异系数 (CV) < 9%;板间变异系数 (CV) < 11%
适用样本 血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液、胸腹水、脑脊液
样本处理要求:
1、血清:全血室温静置2小时或4℃过夜,1000×g离心20分钟取上清;可暂存于-20℃或-80℃,避免反复冻融
2、血浆:推荐使用EDTA或肝素抗凝管采集,采样后30分钟内于2–8℃、1000×g离心15分钟,取上清检测
3、组织匀浆:用预冷PBS冲洗组织去除残留血液,按1:9(重量:体积)比例加入含蛋白酶抑制剂的PBS进行研磨,超声或反复冻融辅助裂解后,5000×g离心5–10分钟取上清
检测流程简要:
一、试剂平衡:将试剂盒各组分于室温放置20分钟,恢复至常温。
二、加样:设空白孔、标准品孔(梯度浓度)、待测样本孔,每孔加入50μL样本或标准品。
三、孵育结合:每孔再加入HRP标记抗体100μL,37℃避光温育60分钟。
四、洗涤:弃液后用洗涤液洗板5次,拍干。
五、显色:每孔加TMB显色液A、B各50μL,37℃避光反应15分钟。
六、终止:每孔加50μL终止液,颜色由蓝转黄。
七、读数:15分钟内于450nm测定OD值,绘制标准曲线并计算浓度。
注意事项:
1. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。样本在使用前也要在室温平衡60分钟。
2. 浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3. 各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4. 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6. 底物请避光保存。
7. 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8. 所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9. 本试剂不同批号组分不得混用。
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