人糖原磷酸化酶同工酶II(GP-II)试剂盒
检测原理:
包被与捕获:试剂盒的微孔板上预先包被了能特异性结合人GP-II的捕获抗体。
抗原抗体反应:向微孔中依次加入待测样本(如血清、血浆)和辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体。样本中的GP-II(抗原)会同时与包被的捕获抗体和HRP标记的检测抗体结合,形成一个“抗体-抗原-抗体”的夹心复合物,并固定在微孔板上。
洗涤:通过洗涤步骤,去除未结合的游离物质。
显色反应:加入底物TMB(3,3',5,5'-四甲基联苯胺)。在HRP的催化下,TMB由无色变为蓝色。
终止与检测:加入终止液(通常为硫酸)后,反应终止,溶液颜色由蓝色变为黄色。颜色的深浅与样本中GP-II的浓度呈正相关。最后,使用酶标仪在450nm波长下测定各孔的吸光度(OD值),通过标准曲线计算出样本中GP-II的浓度。
产品名称:
人糖原磷酸化酶同工酶II(GP-II)ELISA试剂盒
英文名称:Human Glycogen phosphorylase II,GP-II ELISA Kit
规格:48T/96T
货号:LZ-E029100
用途:仅供科研研究实验
核心参数概览:
特异性:试剂盒具有高特异性,与糖原磷酸化酶的其他同工酶(如GP-MM、GP-LL)的交叉反应率通常低于1%。
重复性:用于衡量检测结果的稳定性。通常以变异系数(CV)表示,板内和板间变异系数一般均小于15%。
灵敏度:指试剂盒能够检测到的最低GP-II浓度。不同试剂盒的灵敏度不同,例如,有的产品灵敏度可低于1.0 pg/mL。
检测范围:指试剂盒能够准确定量的浓度区间。例如,标准品的浓度范围可能为78 pg/mL至5000 pg/mL。
检测流程简要:
第一阶段:准备工作 (Pre-preparation)
试剂回温:从冰箱取出试剂盒,将所有试剂(包括浓缩洗涤液、标准品、样本等)在室温(20-25℃)下平衡至少 30分钟。
注意:如果浓缩洗涤液有结晶,需置于37℃水浴助溶并混匀。
标准品稀释:按照说明书要求,使用专用稀释液对标准品进行梯度稀释(通常做7-8个浓度点),现配现用。
样本处理:确保血清、血浆或细胞上清液澄清无沉淀(如有沉淀需再次离心)。
第二阶段:加样与孵育
加样:
在酶标板的对应孔中,分别加入 100 µL(具体体积看说明书)稀释好的标准品和待测样本。
设置空白孔(只加稀释液)。
建议:每个样本做2-3个复孔,数据更可靠。
孵育:
盖上封板膜,放入 37℃ 恒温箱孵育 1-2小时(或按说明书要求,如室温2小时)。
原理:让样本中的抗原与板上的捕获抗体结合。
第三阶段:洗板与检测抗体
洗板(关键步骤):
弃去孔内液体,每孔加满洗涤液(约300-350 µL),静置浸泡 30-60秒 后甩干。
重复洗涤 3-5次。最后一次需在吸水纸上用力拍干,确保无残留液体。
加检测抗体:
每孔加入 100 µL 稀释好的检测抗体工作液(生物素化抗体)。
盖上封板膜,37℃ 孵育 1小时。
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注意事项:
标准曲线:每次实验都必须重新制作标准曲线,不可沿用旧数据。
洗涤步骤:洗涤不充分是导致误差的主要原因,需严格按照说明书洗板(通常3-5次)。
用途限制:此类试剂盒通常仅供科研使用,不可用于临床诊断
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