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| 销售商： 上海联祖生物科技有限公司 | 查看该公司所有产品 >> |
检测原理
目前临床和科研中最常用的是基于国际临床化学联合会（IFCC）推荐的连续监测法（速率法）。其核心原理是通过监测辅酶NADH的消耗速率来计算AST的活性。
第一步反应：在样本中，AST催化L-天门冬氨酸和α-酮戊二酸发生转氨基反应，生成草酰乙酸和L-谷氨酸。
第二步偶联反应：生成的草酰乙酸在苹果酸脱氢酶（MDH）的作用下，被还原为L-苹果酸。同时，反应体系中的还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）被氧化为NAD+。
信号监测：NADH在340nm波长处有特异性吸收峰，而NAD+没有。因此，通过连续监测340nm处吸光度的下降速率，就可以计算出NADH的消耗速率，该速率与样本中AST的活性成正比。
产品属性
主要产品性能参数
酶学试剂盒的参数主要是用于评价其性能的质量控制指标，而非像ELISA试剂盒那样有固定的检测范围。
检测方法：IFCC推荐的连续监测法（速率法）。
线性范围：指仪器能够准确测定的酶活性上限和下限，例如 3 - 1500 U/L。超出此范围需稀释样本后重测。
精密度：包括批内精密度（CV）和批间精密度（CV），通常要求小于5%或更低，以保证结果的重复性。
准确度：通过与参考方法或标准品比对来评估。
第一步反应：在样本中，AST催化L-天门冬氨酸和α-酮戊二酸发生转氨基反应，生成草酰乙酸和L-谷氨酸。
第二步偶联反应：生成的草酰乙酸在苹果酸脱氢酶（MDH）的作用下，被还原为L-苹果酸。同时，反应体系中的还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）被氧化为NAD+。
信号监测：NADH在340nm波长处有特异性吸收峰，而NAD+没有。因此，通过连续监测340nm处吸光度的下降速率，就可以计算出NADH的消耗速率，该速率与样本中AST的活性成正比。
产品属性
| 产品名称 | 人天门冬氨酸转氨酶/谷草转氨酶ELISA试剂盒 | 货号 | LZ-E029093 |
| 英文名称 | Human Aspartate aminotransferase,GOT/GPT ELISA Kit | 规格 | 48T/96T |
| 用途 | 仅供科研实验 | 品牌 | 联祖 |
检测方法：IFCC推荐的连续监测法（速率法）。
线性范围：指仪器能够准确测定的酶活性上限和下限，例如 3 - 1500 U/L。超出此范围需稀释样本后重测。
精密度：包括批内精密度（CV）和批间精密度（CV），通常要求小于5%或更低，以保证结果的重复性。
准确度：通过与参考方法或标准品比对来评估。
ELISA试剂盒实验
第一阶段：准备工作 (Pre-preparation)
试剂回温：从冰箱取出试剂盒，将所有试剂（包括浓缩洗涤液、标准品、样本等）在室温（20-25℃）下平衡至少 30分钟。
注意：如果浓缩洗涤液有结晶，需置于37℃水浴助溶并混匀。
标准品稀释：按照说明书要求，使用专用稀释液对标准品进行梯度稀释（通常做7-8个浓度点），现配现用。
样本处理：确保血清、血浆或细胞上清液澄清无沉淀（如有沉淀需再次离心）。
第二阶段：加样与孵育
加样：
在酶标板的对应孔中，分别加入 100 µL（具体体积看说明书）稀释好的标准品和待测样本。
设置空白孔（只加稀释液）。
建议：每个样本做2-3个复孔，数据更可靠。
孵育：
盖上封板膜，放入 37℃ 恒温箱孵育 1-2小时（或按说明书要求，如室温2小时）。
原理：让样本中的抗原与板上的捕获抗体结合。
第三阶段：洗板与检测抗体
洗板（关键步骤）：
弃去孔内液体，每孔加满洗涤液（约300-350 µL），静置浸泡 30-60秒 后甩干。
重复洗涤 3-5次。最后一次需在吸水纸上用力拍干，确保无残留液体。
加检测抗体：
每孔加入 100 µL 稀释好的检测抗体工作液（生物素化抗体）。
盖上封板膜，37℃ 孵育 1小时。
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ELISA试剂盒性能指标速查表
性能指标 关键参数 优质标准参考 意义
灵敏度 最低检测限 (LoD) 数值越低越好 能否测出微量样本
特异性 交叉反应率 < 5% (越低越好) 是否只测目标物，不误判
精密度 变异系数 (CV) 批内 < 10%, 批间 < 15% 结果是否稳定、可重复
准确性 回收率 80% - 120% 结果是否接近真实值
线性范围 标准曲线区间 覆盖样本预期浓度 能否准确定量高低浓度
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