人铁调素25(Hepc25)ELISA试剂盒

检测原理：
该试剂盒采用竞争结合原理的固相酶联免疫吸附试验（ELISA）。
包被与竞争：预先用纯化的抗人Hepc25特异性单克隆抗体包被酶标板。在反应孔中加入待测样本（含内源性Hepc25抗原）和生物素标记的Hepc25（或酶标记的Hepc25）。
竞争结合：样本中的Hepc25与标记的Hepc25竞争结合包被在板上的有限抗体位点。
关键点：样本中Hepc25浓度越高，占据抗体位点的越多，结合在板上的标记Hepc25就越少；反之亦然。
洗涤与显色：孵育结束后，通过洗涤步骤彻底去除未结合的成分。随后加入链霉亲和素-过氧化物酶复合物（若使用生物素标记）或直接进行显色。加入底物TMB，酶催化底物显色（通常为蓝色）。
终止与测定：加入酸性终止液，反应终止，颜色变为黄色。使用酶标仪在450nm波长下测定各孔的吸光度（OD值）。
结果判读：颜色的深浅（OD值）与样本中Hepc25的浓度呈反比关系。通过绘制标准曲线，即可计算出样本中Hepc25的含量。
产品名称：人铁调素25(Hepc25)ELISA试剂盒
英文名称：Human Hepcidin 25,Hepc25 ELISA Kit
规格：48T/96T
货号：LZ-E029084
用途：仅供科研研究实验
核心参数概览：
不同品牌试剂盒的参数存在差异，以下为典型参考值：
检测范围
通常为 0.35 - 80 ng/mL。
注：具体范围需参照具体产品说明书。
灵敏度
指能够检测到的最低Hepc25浓度，通常要求较高：
通常小于 0.5 ng/mL（例如典型值为 0.35 ng/mL）。
特异性
试剂盒对生物活性Hepc25具有高特异性。
注意：优质的试剂盒能特异性识别Hepc25，不与无活性的截短形式（如Hepc20、Hepc22）或其他多肽发生交叉反应。
精密度（重复性）
用于衡量检测结果的稳定性和可靠性，
样本处理要求：
1‌、血清‌：全血室温静置2小时或4℃过夜，1000×g离心20分钟取上清；可暂存于-20℃或-80℃，避免反复冻融
2‌、血浆‌：推荐使用EDTA或肝素抗凝管采集，采样后30分钟内于2–8℃、1000×g离心15分钟，取上清检测
3‌、组织匀浆‌：用预冷PBS冲洗组织去除残留血液，按1:9（重量:体积）比例加入含蛋白酶抑制剂的PBS进行研磨，超声或反复冻融辅助裂解后，5000×g离心5–10分钟取上清
检测流程简要：
‌一、试剂平衡‌：将试剂盒各组分于室温放置20分钟，恢复至常温。
‌二、加样‌：设空白孔、标准品孔（梯度浓度）、待测样本孔，每孔加入50μL样本或标准品。
‌三、孵育结合‌：每孔再加入HRP标记抗体100μL，37℃避光温育60分钟。
‌四、洗涤‌：弃液后用洗涤液洗板5次，拍干。
‌五、显色‌：每孔加TMB显色液A、B各50μL，37℃避光反应15分钟。
六、终止‌：每孔加50μL终止液，颜色由蓝转黄。
七、读数‌：15分钟内于450nm测定OD值，绘制标准曲线并计算浓度。
注意事项：
1. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。样本在使用前也要在室温平衡60分钟。
2. 浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3. 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4. 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。
5. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6. 底物请避光保存。
7. 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8. 所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9. 本试剂不同批号组分不得混用。
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