人铜锌-过氧化物岐化酶(SOD1)试剂盒
检测原理:
人SOD1 ELISA试剂盒通常采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验(Sandwich ELISA)。
包被与捕获:酶标板的微孔中预先包被了高特异性的抗人SOD1单克隆抗体(捕获抗体)。
加样与结合:向微孔中加入待测样本(如血清、血浆、组织匀浆等)或标准品。样本中的SOD1会与板上的捕获抗体特异性结合。
酶标抗体结合:洗去未结合的物质后,加入生物素标记的抗人SOD1抗体(检测抗体),随后加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的链霉亲和素(Streptavidin-HRP)。检测抗体与已被捕获的SOD1结合,形成“捕获抗体-SOD1-生物素标记抗体-HRP-链霉亲和素”的免疫复合物。
显色与终止:再次洗涤后,加入底物TMB(3,3',5,5'-四甲基联苯胺)。HRP催化TMB发生显色反应,溶液由无色变为蓝色。最后加入终止液(通常为硫酸),反应终止,溶液颜色由蓝色变为黄色。
结果判读:颜色的深浅与样本中SOD1的浓度成正比。使用酶标仪在450nm波长下测定各孔的光密度(OD)值,通过标准曲线即可计算出样本中SOD1的浓度。
产品名称:
人铜锌-过氧化物岐化酶(SOD1)ELISA试剂盒
英文名称:Human Superoxide dismutase [Cu-Zn] (SOD1) ELISA kit
规格:48T/96T
货号:LZ-E029082
用途:仅供科研研究实验
核心参数概览:
参数 常见范围/指标 备注
检测范围 62.5 - 4000 pg/mL (或 19.5 - 5000 U/mL) 单位差异巨大(pg/mL vs U/mL),需特别注意换算,具体视品牌而定。
灵敏度 < 15.6 pg/mL (或 < 19.5 U/mL) 灵敏度通常较高。
特异性 强 可识别天然和重组人SOD1,与其他相关蛋白无明显交叉反应。
重复性 板内CV < 8-10%,板间CV < 10-15% 结果稳定可靠。
分子量 约 32.5 kDa 蛋白理论分子量。
检测流程简要:
第一阶段:准备工作 (Pre-preparation)
试剂回温:从冰箱取出试剂盒,将所有试剂(包括浓缩洗涤液、标准品、样本等)在室温(20-25℃)下平衡至少 30分钟。
注意:如果浓缩洗涤液有结晶,需置于37℃水浴助溶并混匀。
标准品稀释:按照说明书要求,使用专用稀释液对标准品进行梯度稀释(通常做7-8个浓度点),现配现用。
样本处理:确保血清、血浆或细胞上清液澄清无沉淀(如有沉淀需再次离心)。
第二阶段:加样与孵育
加样:
在酶标板的对应孔中,分别加入 100 µL(具体体积看说明书)稀释好的标准品和待测样本。
设置空白孔(只加稀释液)。
建议:每个样本做2-3个复孔,数据更可靠。
孵育:
盖上封板膜,放入 37℃ 恒温箱孵育 1-2小时(或按说明书要求,如室温2小时)。
原理:让样本中的抗原与板上的捕获抗体结合。
第三阶段:洗板与检测抗体
洗板(关键步骤):
弃去孔内液体,每孔加满洗涤液(约300-350 µL),静置浸泡 30-60秒 后甩干。
重复洗涤 3-5次。最后一次需在吸水纸上用力拍干,确保无残留液体。
加检测抗体:
每孔加入 100 µL 稀释好的检测抗体工作液(生物素化抗体)。
盖上封板膜,37℃ 孵育 1小时。
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注意事项:
标准曲线:每次实验都必须重新制作标准曲线,不可沿用旧数据。
洗涤步骤:洗涤不充分是导致误差的主要原因,需严格按照说明书洗板(通常3-5次)。
用途限制:此类试剂盒通常仅供科研使用,不可用于临床诊断
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