人脱氢表雄酮S7(DHEA-S7)ELISA试剂盒
检测原理:
由于DHEA-S属于小分子类固醇激素,通常采用竞争法进行检测。这与常见的大分子蛋白(夹心法)检测不同,其结果判读也是相反的:
包被(抗体):酶标板孔内预先包被了抗人DHEA-S的特异性抗体(固相捕获抗体)。
竞争结合:
往包被的微孔中依次加入标本(含待测DHEA-S)和酶标记的DHEA-S抗原(HRP-DHEA-S)。
标本中的游离DHEA-S与酶标记的DHEA-S竞争结合固相上的有限抗体位点。
竞争机制:标本中DHEA-S浓度越高,占据的抗体位点越多,导致结合在板上的酶标记DHEA-S就越少。
洗涤:彻底洗涤微孔,去除未结合的游离成分(包括未结合的酶标抗原)。
显色反应:加入底物TMB(3,3',5,5'-四甲基联苯胺)。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色。
终止与检测:加入终止液(酸),溶液颜色由蓝变为黄色。
结果判读:颜色的深浅与样品中DHEA-S的浓度呈负相关(即样本浓度越高,OD值越低)。使用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度,通过标准曲线计算浓度。
产品名称:
人脱氢表雄酮S7(DHEA-S7)ELISA试剂盒
英文名称:Human Dehydroepiandrosterone S7,DHEA-S7 ELISA Kit
规格:48T/96T
货号:LZ-E029071
用途:仅供科研研究实验
核心参数概览:
参数项目 典型数值/范围 说明
检测方法 竞争性ELISA 适用于小分子,OD值与浓度负相关
检测波长 450 nm 建议双波长检测(参考波长630nm)
灵敏度 < 0.5 μg/dL (或 < 10 ng/mL) 高灵敏度,满足生理浓度检测
检测范围 0.5 - 100 μg/dL (或 1-300 μg/dL) 覆盖正常及病理浓度范围
特异性 高 与DHEA、睾酮等类固醇激素交叉反应低
重复性 CV < 10% (板内), CV < 15% (板间)
适用样本类型:
该试剂盒适用于多种生物样本,主要包括:
血清
血浆(如EDTA、肝素抗凝)
细胞培养上清液
组织匀浆
细胞裂解液
检测流程简要:
一、试剂平衡:将试剂盒各组分于室温放置20分钟,恢复至常温。
二、加样:设空白孔、标准品孔(梯度浓度)、待测样本孔,每孔加入50μL样本或标准品。
三、孵育结合:每孔再加入HRP标记抗体100μL,37℃避光温育60分钟。
四、洗涤:弃液后用洗涤液洗板5次,拍干。
五、显色:每孔加TMB显色液A、B各50μL,37℃避光反应15分钟。
六、终止:每孔加50μL终止液,颜色由蓝转黄。
七、读数:15分钟内于450nm测定OD值,绘制标准曲线并计算浓度。
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注意事项:
样本要求:溶血的标本会影响检测结果,不宜使用。待测样本应尽早检测,如需保存,应在-20℃或-80℃冷冻,并避免反复冻融。
试剂准备:使用前需将所有试剂置于室温(20-25℃)平衡。浓缩洗涤液若有晶体析出,需在37℃下加热至完全溶解后再稀释使用。
操作规范:
为避免交叉污染,添加每个标准品、样品和试剂时应更换移液器枪头。
底物显色液应呈无色或很浅的颜色,若已变蓝则不能使用。
洗板步骤对结果准确性至关重要,无论是手动还是自动洗板,都应确保洗涤充分,并避免微孔在温育过程中干燥。
任何反应试剂不能接触漂白溶剂或其散发的强烈气体。
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