TRIpure Reagent 总RNA提取试剂

    TRIpure Reagent 是直接从细胞或组织中提取总 RNA 的试剂。它在破碎和溶解细胞时能保持 RNA 的完整性。加入氯仿后离心，样品分成水样层和有机层(鲜红色下层)，RNA 存在于水样层中。收集上面的的水样层后，RNA 可以通过异丙醇沉淀来还原。在除去水样层后，样品中的 DNA 和蛋白也能相继以沉淀的方式还原。乙醇沉淀能析出中间层的 DNA，在有机层中加入异丙醇能沉淀出蛋白。共纯化 DNA 对于样品间标准化 RNA 的产量特别有效。

      无论是人、动物、植物还是细菌组织，该方法对少量的组织(50-100mg)和细胞(5×10⁶)以及大量的组织(≥1g) 和细胞(>10⁷)均有较好的分离效果。TRIpure 试剂操作上的简单性允许同时处理多个的样品。所有的操作可以在一小时内完成。TRIpure 抽提的总 RNA 能够避免 DNA 和蛋白的污染。故而能够作 RNA 印迹分析、斑点杂交、poly(A)+ 选择、mRNA 纯化、体外翻译、RNA 酶保护分析和分子克隆等。如果是用于 PCR，当两条引物位于单一外显子内时，建议用扩增级的 DNase I 来处理抽提的总RNA。

      TRIpure 试剂能促进不同种属不同分子量大小的多种 RNA 的析出。例如，从大鼠肝脏抽提的 RNA 琼脂糖凝胶电泳并用溴化乙啶染色，可见许多介于 7 kb 和 15 kb 之间不连续的高分子量条带(mRNA 和 hnRNA 成分)，两条优势核糖体~5 kb (28S)和~2 kb(18S)，低分子量 RNA 介于 0.1 和 0.3 kb 之间 (tRNA, 5S)。当抽提的 RNA 用 TE 稀释时其 A260/A280 比值≥1.8。

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