BCA蛋白浓度测定试剂盒

     BCA Protein Assay Kit是一种即用型的Western blot相关总蛋白分析试剂，可通过测量562nm处的吸光度并与蛋白标准物的吸光度-浓度曲线进行比较，快速测定总蛋白浓度。蛋白质定量过程可以在45分钟内完成。
      基于BCA (Bicin -choninic Acid) 法研制而成，实现了对蛋白质进行快速、稳定、灵敏的浓度测定。其原理是在碱性环境下蛋白质分子中的肽链结构能与Cu²⁺络合生成络合物。同时将Cu²⁺还原成Cu⁺。该测定法的紫色反应产物是由两个BCA分子与一个亚铜离子螯合形成的。 这种水溶性复合物在562nm处表现出很强的吸光度，在较宽的工作范围 (20-2,000μg/ ml) 中， 随着蛋白质浓度的增加，吸光度几乎呈线性。
      BCA方法不是真正的端点方法，也就是说最终颜色会继续变化。但是孵育后颜色变化的速度足够慢可以允许分析大量的样品。据报道蛋白质的大分子结构，肽键的数量以及四种特定氨基酸 (半胱氨酸、胱氨酸、色氨酸和酪氨酸) 的存在与BCA的颜色形成有关。对二肽、三肽和四肽的研究表明颜色形成的程度不仅仅是由单个产生颜色的官能团的总和引起的。
      因此通常参考诸如牛血清白蛋白 (BSA) 的常见蛋白质的标准来确定待测蛋白质浓度。从蛋白质制备一系列已知浓度的稀释液，并与待测物一起进行测定，然后根据标准曲线确定每个待测物的浓度。如果需要精确定量待测蛋白质，建议选择质量与待测蛋白质相似的蛋白质标准品。例如在测定免疫球蛋白样品时，可以使用牛γ球蛋白 (BGG) 标准品。在介绍的两种检测法中，其中试管检测法需要更大体积 (0.1mL) 的蛋白质样品，但是由于它使用的样品与工作试剂之比为1:20 (v / v)，因此干扰物质的影响降至最低。

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