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| 销售商： 上海研生实业有限公司 | 查看该公司所有产品 >> |
产品概述：
以下为您详解该试剂盒的原理、组成、操作流程及关键注意事项：
公司正在出售的产品：
人肿瘤坏死因子β（Human Tumor Necrosis Factor-beta, TNF-β）ELISA试剂盒是一种用于定量检测人源样本中TNF-β蛋白浓度的高灵敏度科研工具。TNF-β（也称为淋巴毒素α，LT-α）是TNF超家族的重要成员，在免疫调节、炎症反应及淋巴结发育中发挥关键作用。
| 产品名称 | 人肿瘤坏死因子β(TNF-β)ELISA试剂盒 | 英文名称 | TNF-β Elisa Kit |
| 规格 | 48T/96T | 货号 | Y-E107 |
| 保存 | 2-8℃ | 用途 | 仅供科研 |
检测原理.
该试剂盒采用经典的双抗体夹心法（Sandwich ELISA）。
包被：酶标板微孔中预包被抗人TNF-β的特异性单克隆捕获抗体。
结合：加入标准品或待测样本后，其中的TNF-β抗原与固相抗体结合。
孵育：加入生物素标记的抗人TNF-β检测抗体，形成“捕获抗体-抗原-检测抗体”的夹心复合物。
显色：加入HRP（辣根过氧化物酶）标记的链霉亲和素（Streptavidin），通过生物素-亲和素反应连接到复合物上。随后加入TMB底物，HRP催化显色（蓝色），加终止液后变为黄色。颜色深浅与样本中TNF-β浓度呈正比，在450nm波长测定OD值计算浓度。
主要组成成分.
标准试剂盒通常包含以下核心组分：
酶标板：96孔（8×12条）或48孔，已包被捕获抗体。
标准品：人TNF-β冻干粉或原倍液（如10ng/管），用于绘制标准曲线。
生物素标记抗体：检测抗体，需在使用前用专用稀释液配制。
酶结合物：HRP标记的链霉亲和素（Streptavidin-HRP）。
样品稀释液：用于稀释血清、血浆等样本。
浓缩洗涤液：20×浓缩液（含吐温20），使用前需用蒸馏水稀释。
TMB底物液：显色剂，需避光保存。
终止液：通常为2M硫酸溶液。
封板膜：用于孵育时密封。
适用样本类型.
血清：使用血清分离管采集，室温静置30分钟凝固后离心取上清。
血浆：可使用肝素、柠檬酸盐或EDTA作为抗凝剂，采集后30分钟内离心取上清。
细胞培养上清：离心去除细胞碎片。
细胞裂解液：用于检测细胞内TNF-β表达（需加蛋白酶抑制剂）。
标准操作流程 (SOP).
平衡与配液：试剂盒从-20℃或4℃取出，在室温（20-25℃）平衡30分钟。配制洗涤液（如1:20稀释）及各种工作液。
加样：设标准品孔和样本孔，每孔加入50-100μL（建议做复孔）。
温育：37℃恒温箱孵育1-2小时（具体时间视说明书而定）。
洗板：弃去孔内液体，每孔注满洗涤液，静置1分钟后弃去，在吸水纸上拍干。重复3-5次。
加生物素抗体：每孔加入100μL生物素标记抗体工作液，37℃孵育1小时。
洗板：同上。
加酶结合物：每孔加入100μL HRP-链霉亲和素工作液，37℃孵育30分钟。
洗板：同上。
显色：每孔加入TMB底物90-100μL，37℃避光显色10-20分钟。
终止：每孔加入50-100μL终止液，混匀。
读数：在450nm波长处测定OD值（建议在加入终止液后15分钟内读数）。
结果计算
绘制标准曲线：以标准品浓度为横坐标（X），OD值为纵坐标（Y），使用四参数逻辑拟合或对数坐标绘制曲线。
计算浓度：根据样本OD值在曲线上查出浓度。
校正结果：若样本稀释过，结果需乘以稀释倍数。
关键注意事项.
样本保存：样本收集后如不立即检测，应分装冻存于-20℃（≤1个月）或-80℃（≤3个月），严禁反复冻融。
洗涤操作：洗涤不彻底会导致背景过高，影响结果准确性；洗涤过程中避免孔间交叉污染。
试剂混匀：所有液体组分在使用前必须充分摇匀，特别是从冷藏环境中取出的试剂，需平衡至室温并混匀后使用。
底物避光：TMB底物液对光敏感，使用过程中需避光。
标准品溶解：冻干标准品溶解时需静置10分钟以上并轻轻混匀，确保完全溶解。"
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