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| 销售商： 上海研生实业有限公司 | 查看该公司所有产品 >> |
产品概述：
以下基于酶联免疫吸附试验（ELISA）原理，为您详解该试剂盒的操作与特性：
公司正在出售的产品：
人乙酰胆碱（Acetylcholine, ACh）ELISA试剂盒是一种用于体外定量检测人血清、血浆、细胞培养上清、组织匀浆等生物样本中乙酰胆碱含量的科研工具。
乙酰胆碱是神经系统中重要的兴奋性神经递质，参与记忆、认知、肌肉收缩等多种生理功能。其水平异常与阿尔茨海默病、重症肌无力、帕金森病等神经系统疾病密切相关。
| 产品名称 | 人乙酰胆碱(ACH)ELISA试剂盒 | 英文名称 | ACH Elisa Kit |
| 规格 | 48T/96T | 货号 | Y-E213 |
| 保存 | 2-8℃ | 用途 | 仅供科研 |
检测原理.
试剂盒通常采用双抗体夹心法（Sandwich ELISA）：
包被：用纯化的抗人乙酰胆碱（ACh）抗体包被微孔板，制成固相抗体。
加样与结合：加入标准品或待测样本。样本中的ACh与固相抗体结合。
加酶标二抗：加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的抗人ACh检测抗体。抗体与抗原结合，形成“固相抗体-ACh-酶标抗体”夹心复合物。
显色：加入TMB（四甲基联苯胺）底物液。HRP催化TMB显色，溶液呈蓝色。
终止与测定：加入终止液（硫酸），反应终止，溶液颜色由蓝变黄。在酶标仪450nm波长处测定吸光度（OD值）。样本中ACh的浓度与OD值呈正比，通过标准曲线即可计算出ACh的准确浓度。
典型性能参数.
不同品牌试剂盒的灵敏度和检测范围有所差异，以下是综合常见指标的参考范围：
参数指标 典型数值/范围 说明
检测范围 15 nmol/L – 480 nmol/L 部分试剂盒灵敏度更高，可达1-10 nmol/L
灵敏度 < 1.0 nmol/L 最小检测浓度
样本类型 血清、血浆（EDTA/肝素）、组织匀浆、细胞上清 需根据说明书处理
检测时间 2.5 - 5 小时 视具体操作步骤而定
特异性 识别天然和重组人ACh 不与其它结构类似物交叉反应
主要组成成分.
以常见的96孔试剂盒为例，通常包含以下组分：
微孔酶标板：96孔（12条×8孔），预包被抗人ACh抗体。
标准品：冻干粉或液体（浓度梯度通常为480、240、120、60、30、15 nmol/L）。
标准品稀释液：用于溶解和稀释标准品。
样本稀释液：用于稀释待测样本。
检测抗体-HRP：HRP标记的抗人ACh抗体。
浓缩洗涤液：通常为20×浓缩液，使用前需用蒸馏水稀释。
显色剂A和B：TMB底物溶液，需避光保存。
终止液：通常为2M硫酸。
封板膜：用于孵育时密封微孔板。
样本处理与收集.
正确的样本处理是获得准确结果的关键。
1. 血清
采集：使用不含热原和内毒素的试管。
凝固：室温静置2小时或4℃过夜，使其充分凝固。
离心：1000×g离心20分钟，取上清。
2. 血浆
抗凝剂：可使用EDTA或肝素抗凝。
操作：采集后30分钟内，2-8℃下1000×g离心15分钟，取上清。
3. 组织/细胞样本
组织匀浆：按1:9的重量体积比加入PBS（含蛋白酶抑制剂）在冰上研磨，5000×g离心取上清。
细胞上清：离心去除细胞碎片后取上清检测。
关键禁忌：
避免使用溶血、高血脂或浑浊的样本。
样本应避免反复冻融，建议分装保存于-20℃或-80℃。
标准操作流程 (SOP).
平衡：试剂盒从冷藏环境（2-8℃）取出，在室温（20-25℃）平衡15-30分钟。
配液：将浓缩洗涤液用蒸馏水稀释至工作浓度（如1:20稀释）。
加样：设标准品孔和样本孔。每孔加入50-100μL标准品或待测样本。
孵育：封板，37℃温育30-60分钟。
洗板：弃去孔内液体，甩干。用洗涤液注满每孔，静置30秒-1分钟，甩干。重复5次，拍干。
加酶：每孔加入酶标试剂，封板，37℃温育30-60分钟。
洗板：重复步骤5的洗涤过程。
显色：每孔加入TMB显色液，37℃避光显色10-15分钟。
终止：每孔加入终止液，混匀。
读数：在15分钟内于450nm波长下测定OD值。
注意事项.
洗板：洗板不彻底会导致背景过高，拍干不彻底会稀释后续试剂。建议使用自动洗板机以提高重复性。
显色：TMB底物对光敏感，显色过程应避光。若底物变蓝则不可使用。
温育：温育过程中应防止微孔板干燥。
结果计算：建议所有样本做复孔。以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标绘制标准曲线，根据样本OD值计算浓度，并乘以样本稀释倍数，即为实际浓度。"
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