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| 销售商： 上海研生实业有限公司 | 查看该公司所有产品 >> |
产品概述：
人血小板型磷酸果糖激酶（Platelet-type Phosphofructokinase, PFKP）ELISA试剂盒是一种用于体外定量检测人源样本中PFKP蛋白浓度的科研工具。PFKP是糖酵解途径中的关键限速酶，不仅在血小板中高表达，在多种肿瘤组织中也呈现异常表达，因此该试剂盒常用于肿瘤代谢、血栓性疾病及代谢综合征的研究。
公司正在出售的产品：
| 产品名称 | 人血小板型磷酸果糖激酶(PFKP)ELISA试剂盒 | 英文名称 | PFKP Elisa Kit |
| 规格 | 48T/96T | 货号 | Y-E905 |
| 保存 | 2-8℃ | 用途 | 仅供科研 |
人血小板型磷酸果糖激酶（Platelet-type Phosphofructokinase, PFKP）ELISA试剂盒是一种用于体外定量检测人源样本中PFKP蛋白浓度的科研工具。PFKP是糖酵解途径中的关键限速酶，不仅在血小板中高表达，在多种肿瘤组织中也呈现异常表达，因此该试剂盒常用于肿瘤代谢、血栓性疾病及代谢综合征的研究。
以下基于双抗体夹心法原理，为您详解该试剂盒的使用与特性：
检测原理.
试剂盒主要采用双抗体夹心法（Sandwich ELISA）：
包被： 酶标板微孔中预先包被了抗人PFKP的特异性捕获抗体。
加样与结合： 加入标准品或待测样本后，样本中的PFKP抗原与包被抗体特异性结合。
酶标反应： 洗涤后加入生物素标记的检测抗体和辣根过氧化物酶（HRP）标记的链霉亲和素（Streptavidin-HRP），形成“固相抗体-抗原-酶标抗体”夹心复合物。
显色与终止： 加入TMB底物显色（蓝色），反应终止后颜色转为黄色。
定量： 在酶标仪450nm波长下测定吸光度（OD值），样本中PFKP的浓度与OD值成正比，通过标准曲线计算具体浓度。
试剂盒组成.
标准配置通常包含以下组分：
组分名称 描述 保存条件
酶标包被板 96孔（12×8条）或48孔，已包被捕获抗体 2-8℃密封保存
标准品 重组人PFKP（通常为冻干粉） -20℃或4℃
检测抗体 生物素标记的抗人PFKP抗体 2-8℃避光保存
酶结合物 Streptavidin-HRP 2-8℃避光保存
样品稀释液 用于稀释待测样本 2-8℃
标准品稀释液 用于溶解和稀释标准品 2-8℃
浓缩洗涤液 20×或30× PBS-Tween 20 2-8℃
显色剂 TMB底物溶液（A/B液） 2-8℃避光保存
终止液 2M H₂SO₄ 常温
样本要求与处理.
PFKP作为细胞内代谢酶，样本处理需注意防止细胞破裂释放内源性酶干扰，或在检测分泌型PFKP时需防止降解。
适用样本：
血清/血浆： 检测循环中的PFKP。血浆推荐使用EDTA或肝素抗凝。
组织匀浆： 使用预冷的PBS冲洗组织去除血液，按1:9（w/v）比例加入PBS进行匀浆，超声破碎或反复冻融后离心取上清。
细胞裂解液： 收集细胞后用RIPA裂解液提取总蛋白。
采集规范：
离心： 样本若有浑浊，需在1000×g下离心10-20分钟取上清，避免颗粒物干扰读数。
避免溶血： 溶血会释放红细胞内的糖酵解酶，可能导致假阳性。
保存条件：
若不立即检测，应按一次使用量分装，冻存于-20℃或-80℃，严禁反复冻融。
典型性能参数.
检测范围： 常见范围为 0.312 ng/mL ～ 20 ng/mL（不同品牌可能略有差异）。
灵敏度： 最低检测浓度通常小于 0.1 ng/mL（如0.116 ng/mL或0.188 ng/mL）。
特异性： 与人PFK的其他同工型（如PFKL、PFKM）及其他糖酵解酶无交叉反应。
重复性： 板内和板间变异系数（CV）通常<10%。
操作步骤概览.
平衡： 试剂盒从冷藏环境取出，在室温（20-25℃）平衡15-30分钟。
配液： 将浓缩洗涤液按说明书比例（如1:20）用蒸馏水稀释。
配制标准品： 将冻干标准品溶解并进行倍比稀释。
加样： 设定标准品孔和样本孔，加入对应液体（通常50-100μL/孔），37℃温育60分钟。
洗板： 弃液后用洗涤液洗板5次，拍干。
加酶标： 加入检测抗体和酶结合物，37℃温育30-60分钟，再次洗板。
显色： 加入TMB显色液，37℃避光显色10-20分钟。
读数： 加终止液后，15分钟内于450nm波长下读取OD值，计算浓度。
注意事项.
洗板质量： 洗板不彻底会导致背景过高，建议洗板后在吸水纸上拍干，且洗涤液注满微孔。
显色控制： 显色时间不宜过长，应在加入终止液后尽快读数，防止颜色过深导致吸光度值偏离线性范围。
安全防护： 终止液为强酸，操作时请佩戴手套和护目镜。所有样本均应视为潜在传染源处理。"
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