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人血浆抗凝蛋白C(PC) ELISA试剂盒
英文名称:PC ELISA Kit总访问:4
国产/进口:国产半年访问:4
产地/品牌:上研生产品类别:其他生物试剂
规       格:48T/96T 最后更新:2026-3-2
货       号:Y-E2759
CAS   号:
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产品概述:

产品名称 人血浆抗凝蛋白C(PC) ELISA试剂盒 英文名称 PC ELISA Kit
规格 48T/96T 货号 Y-E2759
保存 2-8℃ 用途 仅供科研
 
人血浆抗凝蛋白C(Protein C, PC)ELISA试剂盒是一种用于定量检测人血清、血浆及其他生物样本中抗凝蛋白C含量的体外科研工具。蛋白C是一种由肝脏合成的依赖维生素K的丝氨酸蛋白酶,是人体抗凝系统和调节血栓形成的关键因子,因此该试剂盒在血栓与止血、心血管疾病及免疫炎症研究中具有重要价值。
以下为您详解该试剂盒的原理、组成、操作流程及关键注意事项:
检测原理
该试剂盒普遍采用双抗体夹心法(Sandwich ELISA)。
固相包被:酶标板微孔中预包被了高亲和力的抗人蛋白C(PC)捕获抗体。
样本结合:加入待测样本后,样本中含有的PC抗原与固相抗体特异性结合,未结合的成分在洗涤步骤中被去除。
酶标识别:加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗人PC检测抗体,与已结合的PC抗原形成“抗体-抗原-酶标抗体”的夹心复合物。
显色定量:加入TMB(3,3',5,5'-四甲基联苯胺)底物液,HRP酶催化底物显色(由无色变为蓝色)。反应终止后,颜色由蓝变黄。在450nm波长下测定吸光度(OD值),样本中PC的浓度与OD值呈正相关,通过标准曲线即可计算出精确浓度。
主要组成成分
标准配置通常包含以下组分(具体以说明书为准):
酶标包被板:96孔或48孔,已包被捕获抗体(部分品牌为可拆卸条板)。
标准品:人蛋白C标准品(冻干粉或原倍液),用于系列稀释绘制标准曲线。
标准品稀释液:用于溶解和梯度稀释标准品。
酶标试剂/检测抗体:HRP标记的抗人PC抗体。
浓缩洗涤液:通常为20×或30×浓缩液(含吐温20),使用前需用蒸馏水稀释。
TMB显色液:底物A液和B液(或预混液),需避光保存。
终止液:通常为2M硫酸溶液。
样本稀释液:用于稀释血清、血浆等样本,以减少基质效应。
封板膜:用于孵育时密封微孔板。
适用样本类型
该试剂盒可用于定量检测多种生物样本:
血清:使用无热原、无内毒素试管收集,室温放置2小时或4℃过夜后离心取上清。
血浆:推荐使用EDTA或肝素抗凝,采集后30分钟内离心取上清。注意:柠檬酸钠抗凝剂可能会影响检测结果,建议优先使用EDTA或肝素。
细胞培养上清:离心去除细胞碎片。
组织匀浆:用PBS缓冲液匀浆,离心取上清。
标准操作流程 (SOP)
平衡与配液:试剂盒从2-8℃冷藏环境中取出,在室温(20-25℃)平衡15-30分钟。检查浓缩洗涤液是否有结晶,如有需水浴溶解。按说明书比例(如1:20)用蒸馏水稀释浓缩洗涤液。
加样:设标准品孔和样本孔。每孔加入50-100μL标准品或待测样本(建议做复孔)。
温育:封板,37℃恒温箱孵育30-60分钟(具体时间视说明书而定)。
洗板:弃去孔内液体,每孔注满洗涤液,静置1-2分钟后弃去,在吸水纸上拍干。重复5次。
加酶:每孔加入50-100μL HRP标记的检测抗体,37℃孵育30-60分钟。
洗板:同上。
显色:每孔加入TMB显色液(如A、B液各50μL),37℃避光显色10-20分钟。
终止:每孔加入50μL终止液,混匀。
读数:在15分钟内,于450nm波长处测定OD值。
结果计算
绘制标准曲线:以标准品浓度为横坐标(X),平均OD值为纵坐标(Y),使用Excel或专业软件绘制曲线(通常为线性回归)。
计算浓度:根据样本的OD值,在标准曲线上查出对应浓度,或代入回归方程计算。
校正结果:若样本经过稀释,最终浓度需乘以稀释倍数。
关键注意事项
样本保存:样本收集后如不立即检测,应分装冻存于-20℃或-80℃,避免反复冻融(通常可保存1-2个月)。
抗凝剂选择:EDTA和肝素是检测PC的首选抗凝剂。柠檬酸钠抗凝剂可能会影响PC的检测活性,建议谨慎使用。
试剂混匀:所有试剂在使用前必须充分混匀,特别是从冷藏环境中取出的试剂,需平衡至室温并混匀后使用。
安全防护:终止液具有腐蚀性,TMB具有潜在毒性,请佩戴手套和护目镜操作。"
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