| 产品名称 |
人雄烯二酮(ASD)ELISA试剂盒 |
英文名称 |
ASD Elisa Kit |
| 规格 |
48T/96T |
货号 |
Y-E721 |
| 保存 |
2-8℃ |
用途 |
仅供科研 |
人雄烯二酮(Androstenedione, ASD)ELISA试剂盒是一种用于体外定量检测人血清、血浆及相关液体样本中雄烯二酮含量的科研试剂。雄烯二酮是一种重要的类固醇激素,是睾酮和雌激素的前体,其检测对于评估肾上腺和卵巢功能具有重要意义。
目前市面上的ASD ELISA试剂盒主要分为两类检测原理:竞争抑制法和双抗体夹心法。在选购和使用前,请务必确认您手中试剂盒的具体原理,因为它们的标准曲线走向是相反的。
检测原理

1. 竞争抑制法 (主流原理)
机制: 试剂盒采用生物素标记的抗原与样本中的ASD竞争结合有限的抗体位点。
结果解读: 样本中ASD浓度越高,能与抗体结合的位点就越少,最终显色越浅(OD值越低);反之,样本中ASD浓度越低,显色越深(OD值越高)。标准曲线呈下降趋势。
2. 双抗体夹心法
机制: 利用两种抗体“夹住”抗原。固相抗体捕获样本中的ASD,酶标抗体进行识别和放大信号。
结果解读: 样本中ASD浓度与显色深度呈正比。颜色越深,浓度越高。标准曲线呈上升趋势。
注意: 以下操作步骤以更为常见的竞争抑制法为例进行说明,但具体操作请以您购买的试剂盒说明书为准。
试剂盒组成

一个典型的ASD ELISA试剂盒包含以下组分:
酶标包被板: 已包被特异性抗体的96孔或48孔板。
标准品: 用于建立标准曲线,通常为冻干粉或液体,需按说明书稀释。
酶标试剂: 含辣根过氧化物酶(HRP)的亲和素或检测抗体。
生物素标记抗原: 竞争法专用,用于与样本中的ASD竞争抗体位点。
标准品稀释液 & 样品稀释液: 用于溶解和稀释标准品及待测样本。
浓缩洗涤液: 通常为含吐温-20的磷酸盐缓冲液,使用前需用蒸馏水稀释。
显色剂A液 & B液: 即TMB底物溶液,需避光保存。
终止液: 酸性溶液,用于终止酶促反应。
封板膜: 用于在孵育时密封微孔板。
样本要求与处理

样本的质量直接影响检测结果的准确性。
样本类型: 血清、血浆(EDTA、肝素或柠檬酸钠抗凝)、细胞培养上清、组织匀浆等。
样本采集:
血清: 全血在室温静置2小时或4℃过夜,然后离心(如1000×g,20分钟)取上清。
血浆: 采集后30分钟内离心(如1000×g,15分钟)取上清。
样本保存: 若不立即检测,应将样本分装后于-20℃或-80℃保存,避免反复冻融。
操作步骤概览

试剂平衡: 从冰箱取出试剂盒,平衡至室温(约15-30分钟)。如有浓缩洗涤液结晶,需温水浴溶解。
配置标准品: 在小试管中将标准品进行梯度稀释。
加样: 在微孔板中分别加入标准品和待测样本(通常为50μL/孔)。
加检测液: 加入生物素标记的抗原和酶标试剂。
温育: 用封板膜封板,在37℃恒温箱中温育(如1小时)。
洗涤: 弃去孔内液体,用洗涤液洗板(通常3-5次),拍干。
显色: 加入TMB显色剂A和B,避光温育(如15分钟)。
终止: 加入终止液,轻轻震荡混匀。
读数与计算: 在15分钟内使用酶标仪在450nm波长下测定OD值。根据标准品的浓度和OD值绘制标准曲线,计算样本浓度。
注意事项

原理确认: 使用前务必确认试剂盒是竞争法还是夹心法,以免在结果分析时出现逻辑错误。
洗板: 洗板不彻底是导致数据异常的主要原因之一,需确保洗涤充分且拍干。
显色: 显色时间和温度需严格控制,避免背景过高。
安全: 所有样本和试剂都应视为潜在传染源,按生物安全规范处理废弃物。"