培养操作要点
基础培养基选择:分为天然培养基、合成培养基(如DMEM、RPMI 1640)和无血清培养基。目前以合成培养基和无血清培养基使用居多。
培养条件设置:
温度:多数人和哺乳动物细胞为36-37℃,昆虫细胞为27℃。
pH值:多数哺乳动物细胞为7.4,昆虫细胞为6.2。
CO₂浓度:通常维持5-7% CO₂,多数细胞适合5% CO₂气氛。
渗透压:控制在260-343mOsm/kg为宜。
| 产品名称 |
KYSE-410人食道鳞状细胞癌 |
种属 |
人 |
| 英文名 |
KYSE-410 |
规格 |
1 × 10⁶ cells/T25 |
| 货号 |
LZ-01X871 |
组织来源 |
食管鳞癌 |
商品介绍
产品名称:KYSE-410人食道鳞状细胞癌
英文名称:KYSE-410
生长特性 贴壁细胞
细胞形态 上皮细胞样
冻存条件
冻存液:55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO
温度:液氮
培养方案A(默认)
生长培养基:
RPMI-1640+10% FBS+1% P/S
培养条件:
气相:空气,95%;CO2,5%, 温度:37℃
推荐传代比例 1:4-1:6
推荐换液频率 2-3次/周
参考资料(来源文献)
背景描述 Established from the poorly differentiated invasive esophageal squamous cell carcinoma resected from the cervical esophagus of a 51-year-old Japanese man prior to treatment (tumor invasion into the adventitia was obvious); described in the literature to overexpress hst-1 (= heparin-binding growth factor) and cyclin D1
年龄(性别) 女性;51岁
组织来源 食管鳞癌
细胞类型 肿瘤细胞
肿瘤类型 食管癌细胞
生物等级 BSL-1
倍增时间 ~32-45 hours
保藏机构 DSMZ; ACC-381 ECACC; 94072023 JCRB; JCRB1419
细胞活性检测
这类方法主要用于评估细胞的增殖能力、代谢活性或杀伤功能等。
细胞增殖检测:
DNA合成标记法:如BrdU法,通过检测细胞在增殖时掺入DNA的胸腺嘧啶类似物来反映增殖活性。
代谢活性检测法:如MTT法、CCK-8法,通过检测活细胞线粒体的代谢活性,间接反映活细胞数量。
细胞毒性/杀伤检测:
乳酸脱氢酶 (LDH) 释放法:细胞膜受损后,细胞内的LDH会释放到培养基中,通过检测上清液中LDH的活性来评估细胞毒性。
74Cr释放法:用放射性同位素标记靶细胞,当效应细胞(如NK细胞)杀伤靶细胞后,放射性物质释放,通过测定其放射活性来计算杀伤率。
细胞培养的营养供给
培养基是细胞的“食物”,需要提供全面均衡的营养。
基础培养基: 如DMEM、RPMI-1640等,提供氨基酸、维生素、无机盐、葡萄糖等基本营养物质。
血清: 通常添加10%-20%的胎牛血清,以提供细胞生长所必需的生长因子、激素和贴壁因子。根据需求也可使用低血清的维持培养液。
其他添加物:
谷氨酰胺: 细胞生长的重要氮源,因在溶液中不稳定,需在使用前添加。
抗生素: 如青霉素-链霉素,可预防细菌污染。
细胞因子: 针对特定细胞(如免疫细胞),需添加特定的细胞因子(如白细胞介素-2)来促进其增殖和功能激活。
💧 湿度
培养箱湿度: 通常保持在 95% 以上。
目的: 防止培养基蒸发过快,从而维持培养体系的稳定体积和渗透压。
公司正在出售的产品:
| 溶血LPC(lysophosphatidylcholine)高效液相色谱法定量检测试剂盒 |
细菌醛酮还原酶(aldo-keto reductase)总活性比色法定量检测试剂 |
| 组织总胆汁酸酶偶联反应比色法定量检测试剂盒 |
间隙连接蛋白26/GJB2抗体 |
| 体外波形蛋白(Vimentin)结合分子(binding molecules)检测试剂盒 |
PE标记人IL-4单克隆抗体 |
| 冰冻切片总脂酶活性格莫瑞(Gomori)染色试剂盒 |
根蛋白抗体 |
| 组织基质金属 3H同位素标记检测试剂盒(不包括同位素) |
转录调节因子C/EBPε抗体 |
| 组织II型L-3羟酰基-CoA 脱氢酶/β淀粉样蛋白结合乙醇脱氢酶(HADHII/ABAD)活性比色法定量检测试剂盒 |
FAM160A1蛋白抗体 |
| 基质金属(MMP)明胶酶谱法(zymography) |
膜型卷曲相关蛋白MFRP抗体 |
| AF680标记的钠氢通道蛋白抗体 |
促性腺激素释放激素受体抗体 |
| 细胞络磷酸酶(TP)活性荧光定量检测试剂盒 |
血蓝蛋白抗体 |
| 通用型硫氰酸酶(rhodanase)活性比色法定量检测试剂盒 |
KYSE-410人食道鳞状细胞癌5-羟色胺受体1F抗体 |
| TUBULIN蛋白表达西方杂交分析试剂盒 |
丝氨酸蛋白酶抑制剂B4/鳞状细胞癌抗原2抗体 |
| 组织(folic acid)含量比色法定量检测试剂盒 |
磷酸化gp130抗体 |
注意事项:
接收后处理:
收到细胞后静置 2–4 小时,使细胞恢复状态;
前 3 天每日拍照记录细胞形态与贴壁情况,便于问题追溯;
运输用灌液培养基不可继续使用,需更换为新配制的完全培养基。
污染防控:
定期用 75% 酒精擦拭培养箱内壁;
使用紫外灯照射培养箱内部至少 30 分钟;
水槽使用高压灭菌水或含铜离子溶液抑制微生物生长。
细胞活性检测:
收到后 7 天内可用台盼蓝染色法检测活力,低于 80% 可申请重发。
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