HCC2935人非小细胞肺癌细胞

培养操作要点

基础培养基选择：分为天然培养基、合成培养基（如DMEM、RPMI 1640）和无血清培养基。目前以合成培养基和无血清培养基使用居多。
培养条件设置：
温度：多数人和哺乳动物细胞为36-37℃，昆虫细胞为27℃。
pH值：多数哺乳动物细胞为7.4，昆虫细胞为6.2。
CO₂浓度：通常维持5-7% CO₂，多数细胞适合5% CO₂气氛。
渗透压：控制在260-333mOsm/kg为宜。
商品介绍

产品名称：HCC2935人非小细胞肺癌细胞
英文名称：HCC2935
种属来源：人
性别年龄： 39 岁，男性
组织来源：肺
生长特性： 贴壁生长
细胞形态: 上皮细胞样
细胞规格: 1 X 10 6cells/T25 或 1 mL 冻存管
培养条件: PMI1640 +10%fetal bovine serum37 ℃, 5% CO2
冻存条件: 90% FBS + 10% DMSO
传代方法：1:3 传代, 2-3 天传 1 代
细胞活性检测

这类方法主要用于评估细胞的增殖能力、代谢活性或杀伤功能等。
细胞增殖检测：
DNA合成标记法：如BrdU法，通过检测细胞在增殖时掺入DNA的胸腺嘧啶类似物来反映增殖活性。
代谢活性检测法：如MTT法、CCK-8法，通过检测活细胞线粒体的代谢活性，间接反映活细胞数量。
细胞毒性/杀伤检测：
乳酸脱氢酶 (LDH) 释放法：细胞膜受损后，细胞内的LDH会释放到培养基中，通过检测上清液中LDH的活性来评估细胞毒性。
64Cr释放法：用放射性同位素标记靶细胞，当效应细胞（如NK细胞）杀伤靶细胞后，放射性物质释放，通过测定其放射活性来计算杀伤率。
细胞培养操作流程主要包含以下几个关键步骤：

1. 快速融化： 从液氮中取出冻存管，立即放入37℃水浴中，轻轻晃动，使其在1分钟内快速融化。
2. 转移与稀释： 将融化的细胞悬液转移至含预热完全培养基的离心管中，轻轻混匀，以稀释保护剂DMSO。
3. 离心与重悬： 离心后弃去上清液，用新鲜培养基重悬细胞沉淀。
4. 培养： 将细胞接种到培养瓶中，放入37℃、5% CO₂的培养箱中静置培养。

• 贴壁细胞：
  1. 消化： 吸弃旧培养基，用PBS缓冲液润洗后，加入胰酶（Trypsin）溶液，在37℃下消化1-5分钟，显微镜下观察到大部分细胞变圆脱落时，立即加入含血清的培养基终止消化。
  2. 吹打与计数： 轻轻吹打使细胞完全脱落，制成单细胞悬液，进行计数。
  3. 接种： 按一定比例（如1:3, 1:5）将细胞悬液接种到新的培养瓶中，补充新鲜培养基后放回培养箱。
• 悬浮细胞：
  1. 直接传代： 当细胞密度高、培养基变黄时，可直接将部分细胞悬液转移至新瓶，补充新鲜培养基即可。
  2. 离心传代： 若需去除细胞碎片，可将细胞悬液离心，弃去部分上清或全部上清后，用新鲜培养基重悬细胞，再按比例接种到新瓶中。

1. 贴壁细胞： 直接吸弃旧培养基，加入预热的新鲜完全培养基即可。
2. 悬浮细胞： 将细胞悬液离心，弃去旧培养基（上清液），用新鲜培养基重悬细胞沉淀。
   换液频率一般为2-3天一次，具体根据细胞密度和培养基颜色调整。

1. 收集细胞： 收集处于对数生长期的细胞，离心。
2. 配制冻存液： 用冻存液（常用含10% DMSO和20%胎牛血清的完全培养基）重悬细胞。
3. 程序降温： 将细胞分装至冻存管，放入程序降温盒中，于-80℃冰箱过夜。
4. 长期保存： 次日将冻存管转移至液氮罐中长期保存。

• 细菌污染： 培养基变浑浊、pH值下降（变黄），镜下可见大量快速移动的小颗粒。
• 真菌/酵母污染： 培养基中出现絮状、丝状团块，镜下可见酵母样出芽细胞或菌丝。
• 支原体污染： 培养基外观通常无明显变化，但细胞生长状态会变差，需通过专门试剂盒检测。