注意事项与应用
无菌操作:必须严格无菌无毒,避免微生物污染和不同细胞间交叉污染。
营养需求:需提供氨基酸、维生素、无机盐、促生长因子等,动物细胞还需血清。
抗生素使用:可添加双抗或三抗预防污染,但长期培养不建议持续使用,以防产生耐药性。
细胞培养技术是生物医学研究的基础工具,可用于细胞生理代谢、药物筛选、疫苗生产等研究。不同细胞系的具体培养条件需参考相关文献或实验经验调整。
| 产品名称 |
GCIY人胃癌细胞 |
种属 |
人 |
| 英文名 |
GCIY |
规格 |
1 × 10⁶ cells/T25 |
| 货号 |
LZ-X8752 |
组织来源 |
胃部 |
商品介绍
产品名称:GCIY人胃癌细胞
英文名称:GCIY
种属来源;人
组织来源;胃部
性别年龄;女性,39岁
生长特性;贴壁生长
细胞形态;上皮细胞样
细胞规格;1 X 106cells/T25或1 mL冻存管
培养条件;MEM + 10% Foetal Bovine Serum (FBS)37 ℃, 5% CO2
冻存条件;90% FBS + 10% DMSO
传代方法;1:3传代,2-3天传1代
培养操作要点
基础培养基选择:分为天然培养基、合成培养基(如DMEM、RPMI 1640)和无血清培养基。目前以合成培养基和无血清培养基使用居多。
培养条件设置:
温度:多数人和哺乳动物细胞为36-37℃,昆虫细胞为27℃。
pH值:多数哺乳动物细胞为7.4,昆虫细胞为6.2。
CO₂浓度:通常维持5-7% CO₂,多数细胞适合5% CO₂气氛。
渗透压:控制在260-331mOsm/kg为宜。
细胞冻存 (慢冻)
细胞冻存的目的是使细胞在超低温环境下(如液氮)进入休眠状态,以实现长期保存。关键在于缓慢降温,使细胞内的水分有足够时间渗出,从而减少细胞内冰晶的形成。
1. 冻存前准备
细胞状态:选择处于对数生长期、活力良好(存活率 >80%)、无污染的细胞进行冻存。此时的细胞代谢旺盛,对抗冻存损伤的能力更强。
冻存液配置:常规冻存液由冷冻保护剂(如10% DMSO)和冻存基质(如90% 胎牛血清或完全培养基)组成。DMSO等保护剂能提高细胞膜对水的通透性,帮助细胞内水分渗出,降低冰点,从而减少冰晶形成。
2. 标准操作流程
收集细胞:对于贴壁细胞,使用胰蛋白酶等消化液将其从培养皿上消化下来;悬浮细胞则可直接收集。通过离心去除旧的培养基。
重悬计数:弃去上清液,用配置好的冻存液重悬细胞沉淀,并进行细胞计数。
调整密度:根据细胞类型调整细胞浓度,通常推荐的冻存密度为 1×10⁶ 至 1×10⁷ 个细胞/毫升。
分装:将细胞悬液分装至专用的耐低温冻存管中,通常每管1-2毫升,并在管壁上清晰标记细胞名称、冻存日期、操作者等信息。
程序降温:
标准方法:使用程序降温盒(通常内含异丙醇)或程序降温仪,以 -1℃/min 的速率逐步降温至 -80℃。这个过程通常需要过夜。
替代方法:若无专业设备,可将冻存管放入4℃冰箱30分钟,再转入-20℃冰箱2小时,最后放入-80℃冰箱过夜。
长期保存:程序降温后,应尽快将冻存管转移至 液氮罐(-196℃) 的气相或液相中进行长期保存。若仅存放在-80℃冰箱,保存期限通常不超过6个月。
)🔥 细胞复苏
细胞复苏的目的是将休眠的细胞快速恢复到正常生长温度,同时避免冰晶在融化过程中重新形成,对细胞造成二次损伤。
1. 标准操作流程
快速解冻:从液氮罐中取出冻存管后,立即放入 37℃ 温水浴中,并不时轻轻晃动,使其在 1分钟内 迅速融化。
转移稀释:待细胞悬液完全融化后,用70%乙醇擦拭冻存管消毒,然后在超净台内打开,将细胞悬液缓慢加入含有预热培养基的离心管中,轻轻混匀。培养基的体积应为冻存液体积的10倍以上,以稀释并降低冻存液(如DMSO)的毒性。
离心换液:以1000 rpm离心5分钟,弃去上清液(含冻存液)。然后用新鲜的完全培养基重悬细胞沉淀。
接种培养:将重悬后的细胞接种到合适的培养容器中,放入37℃、5% CO₂的培养箱中静置培养。
更换培养基:建议在复苏后24小时更换一次新鲜培养基,以彻底去除残留的冻存液和死亡细胞碎片,然后继续培养。
公司正在出售的产品:
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