D283 Med人脑髓母细胞瘤细胞

细胞活性检测

这类方法主要用于评估细胞的增殖能力、代谢活性或杀伤功能等。
细胞增殖检测：
DNA合成标记法：如BrdU法，通过检测细胞在增殖时掺入DNA的胸腺嘧啶类似物来反映增殖活性。
代谢活性检测法：如MTT法、CCK-8法，通过检测活细胞线粒体的代谢活性，间接反映活细胞数量。
细胞毒性/杀伤检测：
乳酸脱氢酶 (LDH) 释放法：细胞膜受损后，细胞内的LDH会释放到培养基中，通过检测上清液中LDH的活性来评估细胞毒性。
59Cr释放法：用放射性同位素标记靶细胞，当效应细胞（如NK细胞）杀伤靶细胞后，放射性物质释放，通过测定其放射活性来计算杀伤率。
商品介绍

产品名称：D283 Med人脑髓母细胞瘤细胞
英文名称：D283 Med
生长特性 半贴半悬
细胞形态 上皮细胞样
生长培养基 MEM（含NEAA）＋10% FBS＋1% P/S
冻存条件
冻存液：55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO
温度：液氮
培养条件
气相：空气，95%；CO₂，5%
温度：37℃
推荐传代比例 1:2-1:4
推荐换液频率 2~3次/周
背景描述 D283 Med细胞是由Frien等人于1985年建系，源自一名6岁患有神经管细胞瘤有腹腔转移的白人男性小孩的腹水细胞。
年龄（性别） 男；6岁
组织来源 脑组织
细胞类型 肿瘤细胞
肿瘤类型 成髓瘤细胞
生物等级 1
倍增时间 ~52 hours
致瘤性 Yes, in nude mice(The cells form serially transplantable intercranial and subcutaneous tumors.)Yes, in soft agar
基因表达情况 The cells produce tumors in nude mice and the resulting tumors are glutamine synthetase positive; neuron specific enolase positive; glial fibrillary acidic proteins negative; S100 (S-100) protein negative; The cells express elevated levels of four biochemical markers of SCLC (neuron specific enolase; the brain isoenzyme of creatine kinase; L-DOPA decarboxylase; bombesin-like immunoreactivity)
保藏机构 ATCC; HTB-185IZSLER; BS TCL 203KCB; KCB 2010201YJ
细胞类型与特性

原代细胞：直接从组织中分离的细胞，通常指第1-10代细胞，具有接近体内状态的特性。
细胞系：原代细胞首次传代成功后形成的细胞群，可连续传代。
细胞株：从原代培养或细胞系中获得的具有特殊性质的细胞，通常为第10-58代。
根据生长方式分为：
贴壁细胞：需附着在培养瓶表面生长，如成纤维细胞、上皮细胞。
悬浮细胞：在培养基中自由悬浮生长，如血液细胞。
半贴壁半悬浮细胞：兼具贴壁和悬浮生长特性。
细胞培养操作流程主要包含以下几个关键步骤：

1. 快速融化： 从液氮中取出冻存管，立即放入37℃水浴中，轻轻晃动，使其在1分钟内快速融化。
2. 转移与稀释： 将融化的细胞悬液转移至含预热完全培养基的离心管中，轻轻混匀，以稀释保护剂DMSO。
3. 离心与重悬： 离心后弃去上清液，用新鲜培养基重悬细胞沉淀。
4. 培养： 将细胞接种到培养瓶中，放入37℃、5% CO₂的培养箱中静置培养。

• 贴壁细胞：
  1. 消化： 吸弃旧培养基，用PBS缓冲液润洗后，加入胰酶（Trypsin）溶液，在37℃下消化1-5分钟，显微镜下观察到大部分细胞变圆脱落时，立即加入含血清的培养基终止消化。
  2. 吹打与计数： 轻轻吹打使细胞完全脱落，制成单细胞悬液，进行计数。
  3. 接种： 按一定比例（如1:3, 1:5）将细胞悬液接种到新的培养瓶中，补充新鲜培养基后放回培养箱。
• 悬浮细胞：
  1. 直接传代： 当细胞密度高、培养基变黄时，可直接将部分细胞悬液转移至新瓶，补充新鲜培养基即可。
  2. 离心传代： 若需去除细胞碎片，可将细胞悬液离心，弃去部分上清或全部上清后，用新鲜培养基重悬细胞，再按比例接种到新瓶中。

1. 贴壁细胞： 直接吸弃旧培养基，加入预热的新鲜完全培养基即可。
2. 悬浮细胞： 将细胞悬液离心，弃去旧培养基（上清液），用新鲜培养基重悬细胞沉淀。
   换液频率一般为2-3天一次，具体根据细胞密度和培养基颜色调整。

1. 收集细胞： 收集处于对数生长期的细胞，离心。
2. 配制冻存液： 用冻存液（常用含10% DMSO和20%胎牛血清的完全培养基）重悬细胞。
3. 程序降温： 将细胞分装至冻存管，放入程序降温盒中，于-80℃冰箱过夜。
4. 长期保存： 次日将冻存管转移至液氮罐中长期保存。

• 细菌污染： 培养基变浑浊、pH值下降（变黄），镜下可见大量快速移动的小颗粒。
• 真菌/酵母污染： 培养基中出现絮状、丝状团块，镜下可见酵母样出芽细胞或菌丝。
• 支原体污染： 培养基外观通常无明显变化，但细胞生长状态会变差，需通过专门试剂盒检测。