A549/DDP（人肺腺癌耐顺铂株）

细胞物理特性的检测方法

这类方法利用细胞的物理属性（如大小、密度、电荷等）进行分离和检测。
显微镜直接计数法：利用血球计数板在显微镜下直接计数，操作简单，但耗时且需要经验。
细胞自动计数仪：通过图像分析或库尔特原理进行自动计数，提高了效率和准确性。
流式细胞术 (Flow Cytometry, FCM)：将细胞悬液加压通过激光束，通过检测细胞的散射光（反映大小和颗粒度）和荧光信号（标记的抗体）对单个细胞进行高速、多参数分析和分选。
商品介绍

产品名称：A549/DDP（人肺腺癌耐顺铂株）
英文名称：A549/DDP
细胞别称；A549/DDP；人非小细胞肺癌细胞顺铂耐药株
种属来源；人
组织来源；肺
生长特性；贴壁生长
细胞形态；上皮细胞样
特别提醒；待细胞长到70-80%的汇合度时，去掉培养液，加入含 500ng/ml DDP 的培养液，放入培养箱，这段时间肯定会有小部分细胞悬浮起来，但是不要紧，通过换液可以去掉，下面的细胞待长满就可以消化传瓶了，这时可以一直用含药培养液来消化培养细胞，一两代之后可以将浓度到 1000ng/ml，含药培养液用于细胞培养都没问题的，冻存的时候就不要在冻存液里面加了。(注明：用不含培养基培养一周到两周，再用含药培养基培养。)
是否导耐药基因；否
亲本来源；atcc
细胞代数；10代以内
细胞规格；1x106cells/T25培养瓶或者1mL冻存管包装
支原体检测；无
培养基；90% F12K+10% FBS+PS
培养条件；气相：95%空气+5%二氧化碳；温度：37℃
冻存条件；无血清冻存液，液氮储存
不同类型细胞的特异性（生物特性差异）

形态多样性：细胞形态因功能而异，如成纤维细胞呈梭形或多角形，神经细胞有突起，上皮细胞呈多边形紧密排列；细菌细胞多为球形、杆状或螺旋形。
功能特异性：动物细胞依赖线粒体供能，植物细胞具叶绿体进行光合作用；原核细胞（如细菌）无细胞核，真核细胞（如动植物细胞）有核膜包裹的核；某些细胞如酵母细胞可进行出芽生殖，哺乳动物细胞则通过有丝分裂增殖。
生长特性：贴壁细胞需附着表面生长（如成纤维细胞），悬浮细胞可在培养液中自由生长（如血液细胞）；不同细胞分裂速度各异，如肿瘤细胞增殖较快，正常体细胞分裂较慢。
细胞培养操作流程主要包含以下几个关键步骤：

1. 快速融化： 从液氮中取出冻存管，立即放入37℃水浴中，轻轻晃动，使其在1分钟内快速融化。
2. 转移与稀释： 将融化的细胞悬液转移至含预热完全培养基的离心管中，轻轻混匀，以稀释保护剂DMSO。
3. 离心与重悬： 离心后弃去上清液，用新鲜培养基重悬细胞沉淀。
4. 培养： 将细胞接种到培养瓶中，放入37℃、5% CO₂的培养箱中静置培养。

• 贴壁细胞：
  1. 消化： 吸弃旧培养基，用PBS缓冲液润洗后，加入胰酶（Trypsin）溶液，在37℃下消化1-5分钟，显微镜下观察到大部分细胞变圆脱落时，立即加入含血清的培养基终止消化。
  2. 吹打与计数： 轻轻吹打使细胞完全脱落，制成单细胞悬液，进行计数。
  3. 接种： 按一定比例（如1:3, 1:5）将细胞悬液接种到新的培养瓶中，补充新鲜培养基后放回培养箱。
• 悬浮细胞：
  1. 直接传代： 当细胞密度高、培养基变黄时，可直接将部分细胞悬液转移至新瓶，补充新鲜培养基即可。
  2. 离心传代： 若需去除细胞碎片，可将细胞悬液离心，弃去部分上清或全部上清后，用新鲜培养基重悬细胞，再按比例接种到新瓶中。

1. 贴壁细胞： 直接吸弃旧培养基，加入预热的新鲜完全培养基即可。
2. 悬浮细胞： 将细胞悬液离心，弃去旧培养基（上清液），用新鲜培养基重悬细胞沉淀。
   换液频率一般为2-3天一次，具体根据细胞密度和培养基颜色调整。

1. 收集细胞： 收集处于对数生长期的细胞，离心。
2. 配制冻存液： 用冻存液（常用含10% DMSO和20%胎牛血清的完全培养基）重悬细胞。
3. 程序降温： 将细胞分装至冻存管，放入程序降温盒中，于-80℃冰箱过夜。
4. 长期保存： 次日将冻存管转移至液氮罐中长期保存。

• 细菌污染： 培养基变浑浊、pH值下降（变黄），镜下可见大量快速移动的小颗粒。
• 真菌/酵母污染： 培养基中出现絮状、丝状团块，镜下可见酵母样出芽细胞或菌丝。
• 支原体污染： 培养基外观通常无明显变化，但细胞生长状态会变差，需通过专门试剂盒检测。