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| 销售商： 上海研生实业有限公司 | 查看该公司所有产品 >> |
产品概述：
| 产品名称 | 人腺苷脱氨酶(ADA)ELISA试剂盒 | 英文名称 | ADA Elisa Kit |
| 规格 | 48T/96T | 货号 | Y-E994 |
| 保存 | 2-8℃ | 用途 | 仅供科研 |
人腺苷脱氨酶（ADA）ELISA试剂盒是一种用于体外定量检测人源样本中腺苷脱氨酶含量的科研工具。
ADA在嘌呤代谢中起着至关重要的作用，其检测在肝病、结核病及肿瘤等领域的研究中具有重要价值。以下我为你整理了该试剂盒的详细操作指南及核心知识：
1. 什么是人腺苷脱氨酶 (ADA)？：
腺苷脱氨酶（Adenosine Deaminase, ADA）是一种参与嘌呤核苷代谢的关键酶，它能催化腺苷水解生成次黄嘌呤核苷和氨。
分布：广泛分布于人体各组织中，以胸腺、脾脏和其他淋巴组织中的含量最高，而在肝、肺、肾和骨骼肌等组织中含量较低。
生理功能：ADA是嘌呤代谢中的重要酶类，属于巯基酶。它通过催化腺嘌呤核苷脱氨，维持细胞内嘌呤代谢的平衡。
科研与临床意义：
肝损伤标志物：肝细胞受损时，ADA会释放入血，其活性升高常提示肝实质性损伤（如肝炎、肝硬化）。
结核病辅助诊断：结核性胸水、腹水中的ADA水平通常显著升高，可用于鉴别结核性积液与恶性积液。
免疫缺陷病：ADA严重缺乏会导致严重的联合免疫缺陷病（SCID）。
2. 试剂盒检测原理：
该试剂盒通常采用双抗体夹心法（Sandwich ELISA）：
包被：微孔板上已预包被针对人ADA的特异性捕获抗体。
结合：加入标准品或待测样本后，样本中的ADA抗原与固相抗体结合。
检测：加入酶标（通常为辣根过氧化物酶HRP）的检测抗体，形成“固相抗体-抗原-酶标抗体”的夹心复合物。
显色：加入底物TMB溶液，酶催化底物显色（蓝色）。
终止：加入终止液（通常为硫酸），颜色由蓝变黄。
测定：在450nm波长下测定吸光度（OD值），颜色深浅与样本中ADA的浓度呈正比。
3. 样本收集与处理：
ADA可检测血清、血浆、细胞上清及组织匀浆等样本。
血清：
使用无热原、无内毒素的试管采集血液，室温静置凝固30分钟后，以3000转/分离心10分钟，分离血清。
血浆：
使用EDTA、柠檬酸盐或肝素作为抗凝剂采集血液，离心取上清。
细胞上清/组织匀浆：
细胞：收集细胞培养上清，离心去除细胞碎片。
组织：用预冷的PBS冲洗组织去除血液，按重量体积比（如1:9）加入PBS进行冰上匀浆，离心取上清。
保存：样本若不立即检测，应分装后于-20℃保存，避免反复冻融。
禁忌：样本中不能含有（），因为它会抑制HRP酶的活性。
操作步骤（通用流程）：
操作时请严格遵循具体品牌说明书，以下为通用流程：
平衡：将试剂盒从冷藏环境中取出，在室温（20-25℃）下平衡15-30分钟。
配液：将浓缩洗涤液（如20×或30×）用蒸馏水稀释至1×工作浓度。若有晶体析出，需水浴加热溶解。
加样：设标准品孔和样本孔。加入50-100μL标准品或稀释后的待测样本。
温育：加入酶标试剂（检测抗体-HRP），用封板膜封住微孔板，在37℃恒温箱中温育30-60分钟。
洗涤：弃去孔内液体，每孔注满洗涤液，静置30秒-1分钟，甩干并在吸水纸上拍干。重复5次。
显色：每孔加入显色剂A和B各50μL，37℃避光显色10-15分钟。
终止：每孔加入50μL终止液，混匀。
读数：在15分钟内，使用酶标仪在450nm波长下测定OD值。
结果计算：
绘制标准曲线：以标准品浓度为横坐标（X），对应的平均OD值为纵坐标（Y），绘制标准曲线（通常为四参数逻辑曲线或线性回归）。
计算浓度：根据样本的OD值，在标准曲线上查出对应的浓度。
修正：如果样本经过稀释，最终结果需乘以稀释倍数。"
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