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| 销售商： 上海研生实业有限公司 | 查看该公司所有产品 >> |
产品概述：
| 产品名称 | 人纤维连接素相关抗原(FRA)ELISA试剂盒 | 英文名称 | FRA Elisa Kit |
| 规格 | 48T/96T | 货号 | Y-E351 |
| 保存 | 2-8℃ | 用途 | 仅供科研 |
纤维连接素（Fibronectin）在细胞黏附、迁移及止血过程中起着关键作用。以下我为你整理了该试剂盒的详细操作指南及核心知识：
1. 什么是纤维连接素相关抗原 (FRA)？：
纤维连接素（Fibronectin, FN） 是一种重要的高分子量糖蛋白，广泛存在于血浆、细胞表面和细胞外基质中。
分布与形式：
血浆纤维连接素：主要由肝细胞合成，存在于血液中。
细胞纤维连接素：由多种细胞（如成纤维细胞、内皮细胞）产生，存在于细胞外基质中。
核心功能：
细胞黏附：作为“胶水”，介导细胞与细胞外基质的黏附。
止血与创伤修复：参与血凝块的形成和伤口愈合过程。
免疫调节：作为调理素，协助吞噬细胞清除异物。
科研意义：
肿瘤标志物：在某些肿瘤（如胃癌、结肠癌）中，FRA的表达水平会发生变化，常被用作辅助诊断或预后监测的指标。
肝病研究：肝纤维化或肝硬化时，血清中FRA水平可能升高。
2. 试剂盒检测原理：
该试剂盒通常采用双抗体夹心法（Sandwich ELISA）：
包被：微孔板上已预包被针对人FRA的特异性捕获抗体。
结合：加入标准品或待测样本后，样本中的FRA抗原与固相抗体结合。
检测：加入酶标（通常为辣根过氧化物酶HRP）的检测抗体，形成“固相抗体-抗原-酶标抗体”的夹心复合物。
显色：加入底物TMB溶液，酶催化底物显色（蓝色）。
终止：加入终止液（通常为硫酸），颜色由蓝变黄。
测定：在450nm波长下测定吸光度（OD值），颜色深浅与样本中FRA的浓度呈正比。
3. 样本收集与处理：
FRA可检测血清、血浆、细胞培养上清及组织匀浆等样本。
血清：
使用无菌试管采集血液，室温静置凝固10-20分钟。
在2-8℃条件下，以2000-3000转/分离心20分钟，仔细收集上清。
血浆：
使用EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂采集血液。
混匀后，在2-8℃条件下离心，收集上清。
细胞培养上清：
收集细胞培养液，离心（2000-3000转/分）20分钟去除细胞碎片。
若检测细胞内成分，需用PBS重悬细胞，通过反复冻融破坏细胞膜，然后离心取上清。
组织匀浆：
称取组织重量，加入适量PBS（pH 7.4）进行匀浆。
离心后取上清用于检测。
保存：样本若不立即检测，应分装后于-20℃保存，避免反复冻融。
禁忌：样本中不能含有（），因为它会抑制HRP酶的活性。
操作步骤（通用流程）：
操作时请严格遵循具体品牌说明书，以下为通用流程：
平衡：将试剂盒从冷藏环境中取出，在室温（20-25℃）下平衡15-30分钟。
配液：将浓缩洗涤液（如20×或30×）用蒸馏水稀释至1×工作浓度。若有晶体析出，需水浴加热溶解。
加样：设标准品孔和样本孔。加入50-100μL标准品或稀释后的待测样本。
温育：加入酶标试剂（检测抗体-HRP），用封板膜封住微孔板，在37℃恒温箱中温育30-60分钟。
洗涤：弃去孔内液体，每孔注满洗涤液，静置30秒-1分钟，甩干并在吸水纸上拍干。重复5次。
显色：每孔加入显色剂A和B各50μL，37℃避光显色10-15分钟。
终止：每孔加入50μL终止液，混匀。
读数：在15分钟内，使用酶标仪在450nm波长下测定OD值。
结果计算
绘制标准曲线：以标准品浓度为横坐标（X），对应的平均OD值为纵坐标（Y），绘制标准曲线（通常为四参数逻辑曲线或线性回归）。
计算浓度：根据样本的OD值，在标准曲线上查出对应的浓度。
修正：如果样本经过稀释，最终结果需乘以稀释倍数。"
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