人纤溶酶原(Plasminogen, Plg)ELISA试剂盒是一种专门用于体外定量检测人血清、血浆及其他生物样本中纤溶酶原含量的免疫学工具。
纤溶酶原是血浆中纤溶系统的关键蛋白,主要由肝脏合成。它在组织型纤溶酶原激活物(t-PA)或尿激酶型纤溶酶原激活物(u-PA)的作用下,可转化为具有活性的纤溶酶,从而降解纤维蛋白,参与血栓溶解、细胞迁移和组织修复等过程。检测纤溶酶原水平对于评估纤溶系统功能、血栓性疾病风险以及肝脏合成功能具有重要意义。
以下我为你整理的该试剂盒详细操作与解析指南:
1. 试剂盒核心信息概览.
为了让你快速了解该产品的构成,我整理了以下参数表:
项目 详细信息
中文名称 人纤溶酶原 (Plg) ELISA试剂盒
英文名称 Human Plasminogen (Plg) ELISA Kit
检测方法 双抗体夹心法 (Sandwich ELISA)
规格 48T / 96T
检测范围 视品牌而定(常见:0.625 ~ 40 ng/mL 或 1.56 ~ 100 ng/mL)
灵敏度 最低检测限通常 < 0.3 ng/mL
样本类型 血清、血浆(EDTA/柠檬酸盐/肝素)、细胞上清、尿液、脑脊液
检测波长 450 nm
2. 检测原理.
试剂盒采用双抗体夹心ELISA法:
包被:酶标板微孔中预包被了抗人Plg的特异性抗体。
结合:加入样本后,样本中的Plg抗原与固相抗体特异性结合。
酶标反应:加入酶标记的二抗(如生物素化抗体)及亲和链酶素-HRP,形成“抗体-抗原-酶标抗体”复合物。
显色与定量:加入TMB底物液显蓝色,加入终止液后变黄。在450nm波长下测定吸光度(OD值),OD值与样本中Plg的浓度成正比。
3. 样本采集与处理(关键步骤).
血清 (Serum):
使用无热原、无内毒素的试管收集血液,室温静置使其完全凝固。
1000×g 离心10-20分钟,小心分离血清。
血浆 (Plasma):
可使用EDTA、柠檬酸盐或肝素作为抗凝剂。
混合均匀后,1000×g 离心15-30分钟,取上清液检测。
其他样本:细胞上清、尿液等需离心去除颗粒。
保存:
若不立即检测,样本应分装后于 -20℃ 或 -80℃ 保存。
严禁反复冻融。
4. 核心操作流程(通用版).
平衡:试剂盒从冰箱(2-8℃)取出,在室温(18-25℃)平衡15-30分钟。
配液:浓缩洗涤液(20×或50×)用蒸馏水稀释至1×(如有结晶,需温水浴溶解)。
加样:
设立标准品孔(梯度稀释)。
待测样本孔加入50-100μL样本。
建议做复孔以减少误差。
温育:封板膜封板,37℃温育 1小时。
洗板:弃去孔内液体,每孔注满洗涤液,静置30秒后弃去,重复3-5次,拍干。
加酶:每孔加入酶标工作液(生物素化抗体+SABC/HRP)。
二次温育:37℃温育 30-60分钟。
洗板:同上。
显色:每孔加入TMB显色液,37℃避光显色 10-15分钟。
终止:每孔加入50μL终止液,轻轻震荡混匀。
读数:在15分钟内于450nm波长下测定OD值。
结果计算与科研/临床意义
标准曲线:以标准品浓度为横坐标(X),OD值为纵坐标(Y),绘制标准曲线。
浓度计算:将样本的OD值代入方程,计算出原始浓度。
科研/临床意义:.
纤溶功能评估:Plg水平降低可能导致纤溶功能低下,增加血栓风险;水平升高可能与高纤溶状态相关。
肝脏疾病:作为肝脏合成的蛋白质,其水平可反映肝细胞合成功能。
肿瘤研究:纤溶系统在肿瘤侵袭和转移中起重要作用,Plg及其激活物是研究热点。"