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| 销售商： 上海研生实业有限公司 | 查看该公司所有产品 >> |
产品概述：
| 产品名称 | 人细胞周期素D1(Cyclin-D1)ELISA试剂盒 | 英文名称 | Cyclin-D1 Elisa Kit |
| 规格 | 48T/96T | 货号 | Y-E310 |
| 保存 | 2-8℃ | 用途 | 仅供科研 |
以下为您详解该试剂盒的相关信息：
🧪 检测原理：
人Cyclin-D1 ELISA试剂盒通常采用双抗体夹心法（Sandwich ELISA）原理：
包被：将抗人Cyclin-D1的特异性单克隆抗体预先包被在酶标板微孔中，制成固相抗体。
加样与结合：加入待测样本或标准品，样本中的Cyclin-D1抗原与固相抗体特异性结合。
加检测抗体：加入酶标记（通常为辣根过氧化物酶HRP）的检测抗体，形成“固相抗体-Cyclin-D1-酶标抗体”的夹心复合物。
洗涤：洗去未结合的游离酶标抗体。
显色与终止：加入TMB显色底物，HRP催化底物产生蓝色反应。加入终止液（通常为硫酸）后，溶液颜色由蓝变黄。
测定：使用酶标仪在450 nm波长下测定吸光度（OD值）。颜色的深浅与样品中Cyclin-D1的浓度呈正相关。通过标准曲线计算出样品中Cyclin-D1的精确浓度。
主要组成：
不同品牌试剂盒的具体组分可能略有差异，以下是一个典型的配置示例：
组分名称 规格示例 (96孔) 主要用途
酶标包被板 96孔 预包被抗Cyclin-D1捕获抗体。
标准品 1支 (0.3-0.5ml) 用于配制标准曲线（如0.312-20 ng/mL）。
标准品稀释液 1瓶 用于溶解和稀释标准品。
样品稀释液 1瓶 用于稀释待测样本（如血清/血浆）。
检测抗体-HRP 1瓶 辣根过氧化物酶标记的检测抗体。
显色剂A液/B液 各1瓶 TMB显色底物，反应后呈蓝色。
终止液 1瓶 终止反应，使溶液变黄。
浓缩洗涤液 1瓶 (20×) 用于稀释后洗涤酶标板。
核心性能参数：
检测范围 (Sensitivity)：不同品牌差异较大。例如，有的试剂盒检测范围为 0.312 - 20 ng/mL，灵敏度（最低检测浓度）小于 0.157 ng/mL。
特异性 (Specificity)：能够特异性识别人Cyclin-D1，与其它细胞因子或结构类似物无明显交叉反应。
适用样本类型：适用于血清、血浆（EDTA、肝素抗凝）、组织匀浆、细胞裂解液及细胞培养上清等。
精密度 (Precision)：板内变异系数（CV%）通常小于10%，板间变异系数小于15%。
检测时间：整个检测过程约需 4-5小时。
操作步骤概览：
准备：试剂盒从冷藏环境中取出，在室温（20-25℃）下平衡15-30分钟。将浓缩洗涤液按说明书比例（如1:20）用去离子水稀释。
加样：设置标准品孔和待测样品孔。在相应孔中加入50-100μL标准品或样本。
温育：用封板膜封板，置于37℃恒温箱中温育30-60分钟。
洗涤：弃去孔内液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，重复5次，最后拍干。
加酶标试剂：每孔加入检测抗体-HRP（空白孔除外），37℃温育30-60分钟，再次洗涤。
显色与终止：每孔加入TMB显色剂A、B各50μL，37℃避光显色10-15分钟，加入50μL终止液。
测定：以空白孔调零，在450 nm波长下测定各孔的OD值，并计算样本浓度。
注意事项：
样本处理：
血清：室温静置2小时或4℃过夜，离心取上清。-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。
血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，采集后30分钟内离心取上清。
组织匀浆：建议用预冷的PBS（1:9重量体积比）进行匀浆，并在冰上操作，离心取上清检测。
试剂使用：
洗涤液结晶：浓洗涤液在低温下可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，不影响结果。
底物避光：显色剂对光敏感，应避光保存和使用。
禁忌：不能检测含有（）的样本，因为会抑制HRP酶的活性。
操作规范：
温育：必须严格按照说明书规定的时间和温度进行温育。
读数：加入终止液后，应在15分钟内完成酶标仪读数。
洗涤：洗涤步骤是关键，必须确保洗板彻底，防止残留导致背景过高。"
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