| 产品名称 |
人维生素K1(VK1)ELISA试剂盒 |
英文名称 |
VK1 ELISA Kit |
| 规格 |
48T/96T |
货号 |
Y-E2702 |
| 保存 |
2-8℃ |
用途 |
仅供科研 |
人维生素K1(Vitamin K1, VK1)ELISA试剂盒是一种用于体外定量检测人血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中维生素K1含量的科研工具。维生素K1(叶绿醌)是肝脏合成凝血因子II、VII、IX和X所必需的辅因子,其检测对于研究凝血功能障碍、骨代谢疾病及新生儿出血症具有重要意义。
以下为您详解该试剂盒的相关信息:
🧪 检测原理:

人VK1 ELISA试剂盒通常采用双抗体夹心法(Sandwich ELISA)原理:
包被:将抗人VK1的特异性单克隆抗体预先包被在酶标板微孔中,制成固相抗体。
加样与结合:加入待测样本(如血清、血浆)或标准品。样本中的VK1抗原与固相抗体特异性结合。
加检测抗体:加入酶标记(通常为辣根过氧化物酶HRP)的检测抗体,形成“固相抗体-VK1-酶标抗体”的夹心复合物。
洗涤:洗去未结合的游离酶标抗体。
显色与终止:加入TMB(3,3',5,5'-四甲基联苯胺)显色底物,HRP催化底物产生蓝色反应。加入终止液(通常为硫酸)后,溶液颜色由蓝变黄。
测定:使用酶标仪在450 nm波长下测定吸光度(OD值)。颜色的深浅与样品中VK1的浓度呈正相关。通过标准曲线计算出样品中VK1的精确浓度。
主要组成:

不同品牌试剂盒的具体组分可能略有差异,以下是一个典型的配置示例:
组分名称 规格示例 (96孔) 主要用途
酶标包被板 96孔 预包被抗VK1捕获抗体。
标准品 1支 (0.3ml) 用于配制标准曲线(如0.25 - 8 ng/mL)。
标准品稀释液 1瓶 用于溶解和稀释标准品。
样品稀释液 1瓶 用于稀释待测样本(如血清/血浆)。
检测抗体-HRP 1瓶 辣根过氧化物酶标记的检测抗体。
显色剂A液/B液 各1瓶 TMB显色底物,反应后呈蓝色。
终止液 1瓶 终止反应,使溶液变黄。
浓缩洗涤液 1瓶 (20×) 用于稀释后洗涤酶标板。
核心性能参数:

检测范围 (Sensitivity):不同品牌差异较大。例如,有的试剂盒检测范围为 0.25 - 8 ng/mL,灵敏度(最低检测浓度)小于 0.1 ng/mL。
特异性 (Specificity):能够特异性识别人VK1,与其它可溶性结构类似物(如维生素K2)无明显交叉反应。
适用样本类型:适用于血清、血浆(EDTA、柠檬酸盐、肝素抗凝)、组织匀浆、细胞裂解液及细胞培养上清等。
精密度 (Precision):板内变异系数(CV%)通常小于10%,板间变异系数小于15%。
操作步骤概览:

准备:试剂盒从冷藏环境中取出,在室温(20-25℃)下平衡15-30分钟。将浓缩洗涤液按说明书比例(如1:20)用去离子水稀释。
加样:设置标准品孔和待测样品孔。在相应孔中加入50-100μL标准品或样本。
温育:用封板膜封板,置于37℃恒温箱中温育30-60分钟。
洗涤:弃去孔内液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,重复5次,最后拍干。
加酶标试剂:每孔加入检测抗体-HRP(空白孔除外),37℃温育30-60分钟,再次洗涤。
显色与终止:每孔加入TMB显色剂A、B各50μL,37℃避光显色10-15分钟,加入50μL终止液。
测定:以空白孔调零,在450 nm波长下测定各孔的OD值,并计算样本浓度。
注意事项:

样本处理:
血清:室温静置2小时或4℃过夜,离心取上清。-20℃或-80℃保存,避免反复冻融。
血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,采集后30分钟内离心取上清。
组织匀浆:建议用预冷的PBS(1:9重量体积比)进行匀浆,并在冰上操作,离心取上清检测。
试剂使用:
洗涤液结晶:浓洗涤液在低温下可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,不影响结果。
底物避光:显色剂对光敏感,应避光保存和使用。"