人透明质酸(Hyaluronic Acid, HA)ELISA试剂盒是用于体外定量检测人血清、血浆、细胞培养上清等样本中透明质酸浓度的专用工具。HA是由间质细胞合成的一种大分子糖胺聚糖,是细胞外基质的主要成分之一。它在组织修复、炎症反应以及肝纤维化程度评估中扮演着关键角色。
🧪 检测原理.
试剂盒主要采用双抗体夹心法(Sandwich ELISA)原理:
包被:微孔板上预包被抗人HA的特异性捕获抗体。
加样与结合:将标准品或待测样本加入微孔中,样本中的HA与固相抗体结合。
酶标反应:加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体,形成“固相抗体-抗原-HA-酶标抗体”夹心复合物。
显色:加入底物TMB(四甲基联苯胺),在HRP的催化下生成蓝色产物。
终止与测定:加入终止液(通常为硫酸),溶液颜色由蓝变黄。使用酶标仪在450nm波长处测定吸光度(OD值)。样本中HA的浓度与OD值呈正比。
典型性能参数.
参数项 典型数值/描述
检测范围 6.25 – 200 ng/mL (不同品牌差异较大,部分可达0.156-10 ng/mL)
灵敏度 < 4 pg/mL – 0.1 ng/mL (最低检测限)
反应时间 约 3 – 5 小时
样本类型 血清、血浆(EDTA/肝素)、组织匀浆、细胞培养上清、尿液等
种属特异性 人(Homo sapiens)
精密度 板内/板间变异系数(CV)均 < 10%
🩸 临床与科研意义.
肝纤维化诊断:HA是评估肝纤维化程度的非侵入性血清学指标。肝星状细胞活化导致细胞外基质沉积,血清HA水平随肝纤维化分期升高而显著升高。
肿瘤标志物:在卵巢癌、乳腺癌等恶性肿瘤中,HA及其受体CD44的异常表达与肿瘤侵袭、转移及预后密切相关。
骨关节炎评估:关节滑液中的HA浓度和分子量变化可反映关节软骨的退变程度。
皮肤修复:在皮肤创伤愈合和组织工程研究中,HA是监测炎症和再生过程的重要指标。
注意事项.
为确保实验结果的准确性和安全性,请务必注意以下事项:
严禁NaN₃:样本及试剂中不能含有(NaN₃),因为它会抑制辣根过氧化物酶(HRP)的活性,导致显色失败。
样本处理:严重溶血或脂血样本可能干扰检测,应尽量避免。组织匀浆需充分离心去除沉淀。
试剂平衡:试剂盒从冰箱(2-8℃)取出后,需在室温(20-25℃)平衡15-60分钟后再打开使用。浓缩洗涤液若有结晶,属正常现象,可水浴加热溶解。
洗板规范:洗板是影响结果的关键。手工洗板需重复5次,拍干,防止残留物引起背景过深。"