产品描述
PDI是具有异构酶活性的蛋白,催化蛋白二硫键形成、断裂与重排参与蛋白质折叠与内质网应激调控过程,其功能异常会导致蛋白质折叠障碍,引发神经退行性疾病、自身免疫病等症状,是神经与免疫疾病研究的重要靶点。该活性蛋白可用于蛋白质折叠与内质网应激机制研究、神经与免疫疾病药物筛选,适用于异构酶活性检测、蛋白质折叠分析、免疫共沉淀,也可用于抗体制备与内质网应激诊断试剂研发。
| 物种 |
Homo sapiens (Human,人) |
货号 |
GOY-01D3090 |
| 性状 |
冻干粉 |
实际分子量 |
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商品介绍
产品名称:蛋白二硫键异构酶(PDI)活性蛋白
物种:Homo sapiens (Human,人)
英文名称:Active Protein Disulfide Isomerase (PDI)
P4HB; ERBA2L; PDIA1; PO4DB; PROHB, DSI, GIT, PDI, PO4HB, P4Hbeta; Prolyl 4-Hydroxylase Subunit Beta; Procollagen-Proline 2-Oxoglutarate 4-Dioxygenase Beta Polypeptide
型号:GOY-01D3090
酶与激酶
物种:Homo sapiens (Human,人)
缓冲液成份:20mM Tris, 150mM NaCl缓冲液(pH8.0, 含有1mM EDTA, 1mM DTT, 0.01% SKL, 5% Trehalose和Proclin300)
性状:冻干粉
纯度:> 90%
等电点:-
应用:Cellculture;ActivityAssays.
蛋白纯化实验步骤
1. 亲和层析纯化
柱子平衡:用平衡缓冲液平衡亲和层析柱(如Ni-NTA柱用于His标签蛋白)
上样:将细胞裂解液缓慢加入层析柱中
洗杂:用含低浓度咪唑的洗杂缓冲液洗涤柱子,去除杂蛋白
洗脱:用含高浓度咪唑的洗脱缓冲液洗脱目标蛋白
收集:收集洗脱峰,用BCA法测定蛋白浓度
2. 离子交换层析纯化
柱子平衡:用相应的缓冲液平衡离子交换柱(如DEAE阴离子交换柱、CM阳离子交换柱)
样品预处理:将蛋白样品透析或超滤到上样缓冲液中
上样:将样品加入层析柱中
梯度洗脱:用不同离子强度的缓冲液进行梯度洗脱
收集:收集目标蛋白峰,SDS-PAGE检测纯度
3. 凝胶过滤层析纯化
柱子平衡:用凝胶过滤缓冲液平衡柱子
上样:将蛋白样品上样到柱子中
洗脱:用凝胶过滤缓冲液洗脱,根据分子量分离蛋白
收集:收集目标蛋白峰,SDS-PAGE检测纯度
使用说明
解冻: 使用前,将冻存管置于冰上缓慢解冻。避免在室温或 37°C 水浴中快速解冻,以减少蛋白聚集或失活。
混匀: 解冻后,轻轻涡旋或上下颠倒混匀。避免剧烈振荡产生泡沫。
分装: 根据单次实验用量进行分装,避免反复冻融。未使用的分装液应立即放回 -70°C 至 -80°C 保存。
稀释: 如需稀释,请使用推荐的储存缓冲液或实验所需的特定缓冲液(注意 pH 和离子强度对活性的影响)。避免使用含有强还原剂(如 DTT)或高浓度变性剂的缓冲液,除非实验需要。
活性测定: 建议参考标准 GST 活性测定方案(如 Habig et al., 1974)进行,并根据具体实验目的优化条件。标准底物常为 CDNB (1-chloro-2,4-dinitrobenzene) 和 GSH,在 340 nm 监测吸光度变化。
注意事项
仅供研究使用: 本产品仅限用于科学研究,不可用于诊断、治疗或任何人类或动物临床应用。
生物安全: 虽然表达宿主为大肠杆菌,且经过纯化,但仍建议在适当的实验室条件下操作,遵循良好的实验室规范 (GLP)。
避免反复冻融: 反复冻融会导致蛋白降解和活性丧失。务必分装保存。
储存温度: 长期储存必须严格在 -70°C 至 -80°C。短期(数天至数周)可在 -20°C 存放,但活性可能略有下降。
标签影响: N 端 His 标签通常对酶活性影响较小,但在某些特定研究(如精确的结构功能关系)中需考虑其潜在影响。
批次差异: 不同批次产品的具体活性值可能略有差异,请以当批次的 COA 为准。
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