| 产品名称 |
人同型半胱氨酸(Hcy)ELISA试剂盒 |
英文名称 |
Hcy Elisa Kit |
| 规格 |
48T/96T |
货号 |
Y-E834 |
| 保存 |
2-8℃ |
用途 |
仅供科研 |
人同型半胱氨酸(Homocysteine, Hcy)ELISA试剂盒是一种用于体外定量检测人血清、血浆及相关液体样本中同型半胱氨酸含量的科研工具。Hcy是一种含硫氨基酸,是蛋氨酸代谢过程中的重要中间产物,其血浆浓度升高与心血管疾病、脑血管疾病及阿尔茨海默病等密切相关。
以下为您详解该试剂盒的相关信息:
🧪 检测原理

人Hcy ELISA试剂盒通常采用双抗体夹心法(Sandwich ELISA)原理:
包被:用纯化的抗人Hcy抗体包被微孔板,制成固相抗体。
加样与结合:往包被的微孔中加入待测样本(如血清、血浆),样本中的Hcy抗原与固相抗体结合。
加酶标抗体:加入HRP(辣根过氧化物酶)标记的抗人Hcy抗体,与已结合的Hcy抗原结合,形成“固相抗体-Hcy-酶标抗体”的夹心复合物。
洗涤:彻底洗涤微孔,去除未结合的游离酶标抗体。
显色与终止:加入TMB显色底物,HRP催化底物产生蓝色反应。加入终止液后,溶液颜色由蓝变黄。
测定:使用酶标仪在450 nm波长下测定吸光度(OD值)。样本中Hcy的浓度与OD值呈正比,通过标准曲线计算出样本中Hcy的精确浓度。
主要组成

不同品牌试剂盒的具体组分可能略有差异,以下是一个典型的配置示例:
组分名称 规格示例 (96孔) 主要用途
酶标包被板 96孔 (12条 × 8孔) 预包被抗Hcy捕获抗体。
标准品 1支 (0.5ml) 用于配制标准曲线(如0-18 μmol/L或更高)。
标准品稀释液 1瓶 (1.5ml) 用于溶解和稀释标准品。
样品稀释液 1瓶 (6ml) 用于稀释待测样本(如血清/血浆)。
酶标试剂 (HRP) 1瓶 (6ml) 辣根过氧化物酶标记的检测抗体。
显色剂A液/B液 各1瓶 (6ml) TMB显色底物,反应后呈蓝色。
终止液 1瓶 (6ml) 终止反应,使溶液变黄。
浓缩洗涤液 1瓶 (20×/30×) 用于稀释后洗涤酶标板。
核心性能参数

检测范围 (Sensitivity):不同品牌差异较大。例如,有的试剂盒检测范围为 1 - 32 μmol/L,灵敏度可达 0.1 μmol/L;有的检测范围为 0.5 - 40 μmol/L。
特异性 (Specificity):能够特异性识别人Hcy,与其它氨基酸或结构类似物无明显交叉反应。
适用样本类型:适用于血清、血浆(EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝)、组织匀浆、细胞培养上清、尿液、胸腹水及脑脊液等。
精密度 (Precision):板内变异系数(CV%)通常小于10%,板间变异系数小于15%。
操作步骤概览

准备:试剂盒从冷藏环境中取出,在室温(20-25℃)下平衡15-30分钟。将浓缩洗涤液按说明书比例(如1:20或1:30)用去离子水稀释。
加样:设置标准品孔和待测样品孔。在相应孔中加入50-100μL标准品或样本。
温育:用封板膜封板,置于37℃恒温箱中温育30-60分钟。
洗涤:弃去孔内液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,重复5次,最后拍干。
加酶标试剂:每孔加入酶标试剂(空白孔除外),37℃温育30-60分钟,再次洗涤。
显色与终止:每孔加入TMB显色剂A、B各50μL,37℃避光显色10-15分钟,加入50μL终止液。
测定:以空白孔调零,在450 nm波长下测定各孔的OD值,并计算样本浓度。
注意事项
样本处理:

血清:室温血液自然凝固10-20分钟后,离心取上清。
血浆:使用EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝,离心取上清。
保存:样本采集后应尽快提取并进行实验。若不能马上检测,可将样本存放于-20℃保存,但应避免反复冻融。
试剂使用:
洗涤液结晶:浓洗涤液在低温下可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,不影响结果。
底物避光:显色剂对光敏感,应避光保存和使用。
禁忌:不能检测含有()的样本,因为会抑制HRP酶的活性,导致检测失败。
操作规范:

温育:必须严格按照说明书规定的时间和温度进行温育。
读数:加入终止液后,应在15分钟内完成酶标仪读数。
洗涤:洗涤步骤是关键,必须确保洗板彻底,防止残留导致背景过高。"