(Glycosylated Serum Protein, GSP)ELISA试剂盒是一种用于体外定量检测人血清、血浆及其他生物液体中糖化血清蛋白浓度的科研工具。GSP是血糖与血清蛋白(主要是白蛋白)发生非酶促糖化反应的产物,其水平能反映近期(2-3周)的平均血糖浓度,常用于糖尿病的辅助诊断及短期血糖控制情况的监测。
| 产品名称 |
人糖化蛋白(GSP)ELISA试剂盒 |
英文名称 |
GSP ELISA Kit |
| 规格 |
48T/96T |
货号 |
Y-E2904 |
| 保存 |
2-8℃ |
用途 |
仅供科研 |
检测原理

人GSP ELISA试剂盒通常采用双抗体夹心法(Sandwich ELISA)原理:
包被:将抗人GSP的特异性抗体预先包被在酶标板微孔中,制成固相抗体。
加样与结合:加入待测样本或标准品,样本中的GSP抗原与固相抗体特异性结合。
加酶标二抗:加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗人GSP抗体(或抗人白蛋白抗体,视试剂盒设计而定)。该抗体与已结合的GSP抗原结合,形成“固相抗体-GSP-酶标抗体”的夹心复合物。
洗涤:洗去未结合的游离酶标抗体。
显色与终止:加入TMB显色底物,HRP催化底物产生蓝色反应。加入终止液(通常为硫酸)后,溶液颜色由蓝变黄。
测定:使用酶标仪在450 nm波长下测定吸光度(OD值)。样本中GSP的浓度与OD值呈正比,通过标准曲线计算出其精确浓度。
主要组成

不同品牌试剂盒的具体组分可能略有差异,以下是一个典型的配置示例:
组分名称 规格示例 (96孔) 主要用途
酶标包被板 96孔 (12条 × 8孔) 预包被抗GSP捕获抗体。
标准品 1支 (冻干/液体) 用于配制标准曲线,浓度涵盖检测范围。
标准品稀释液 1瓶 用于溶解和稀释标准品。
样品稀释液 1瓶 用于稀释待测样本(如血清/血浆)。
酶标试剂 (HRP) 1瓶 辣根过氧化物酶标记的检测抗体。
显色剂 (TMB) A液、B液 显色底物,反应后呈蓝色。
终止液 1瓶 (硫酸) 终止反应,使溶液变黄。
浓缩洗涤液 1瓶 (20×/30×) 用于稀释后洗涤酶标板。
封板膜 2张 用于温育时密封板孔。
核心性能参数

检测范围 (Sensitivity):不同品牌差异较大,具体数值需参考说明书。
特异性 (Specificity):能够特异性识别人GSP,与人血清白蛋白(HSA)及其他糖蛋白无明显交叉反应。
适用样本类型:适用于血清、血浆(EDTA、柠檬酸盐、肝素抗凝)、细胞上清液、尿液、脑脊液及组织匀浆等。
精密度 (Precision):板内变异系数(CV%)通常小于10%,板间变异系数小于15%。
操作步骤概览

准备:试剂盒从冷藏环境中取出,在室温(20-25℃)下平衡15-30分钟。将浓缩洗涤液按说明书比例(如1:20或1:30)用去离子水稀释。
加样:设置标准品孔和待测样品孔。在相应孔中加入50-100μL标准品或样本。
温育:用封板膜封板,置于37℃恒温箱中温育30-60分钟。
洗涤:弃去孔内液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,重复5次,最后拍干。
加酶标试剂:每孔加入酶标试剂(空白孔除外),37℃温育30-60分钟,再次洗涤。
显色与终止:每孔加入TMB显色剂A、B各50μL,37℃避光显色10-15分钟,加入50μL终止液。
测定:以空白孔调零,在450 nm波长下测定各孔的OD值,并计算样本浓度。
注意事项

样本处理:
血清:室温静置2小时或4℃过夜,离心取上清。-20℃或-80℃保存,避免反复冻融。
血浆:可用EDTA、柠檬酸盐或肝素作为抗凝剂,采集后30分钟内离心取上清。
组织/细胞:需使用适量生理盐水或RIPA裂解液进行匀浆/裂解,离心取上清检测。
试剂使用:
洗涤液结晶:浓洗涤液在低温下可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,不影响结果。
底物避光:显色剂请避光保存,使用前现配现用。
禁止混用:不同批次的试剂盒组分严禁混用。
操作规范:
温育:必须严格按照说明书规定的时间和温度进行温育。
读数:加入终止液后,应在15分钟内完成酶标仪读数。
洗涤:洗涤步骤是关键,必须确保洗板彻底,防止残留导致背景过高。"