人丝氨酸蛋白酶(Serine Protease, PRSS)ELISA试剂盒是一类用于定量检测人源样本中特定丝氨酸蛋白酶表达水平的科研工具。丝氨酸蛋白酶家族成员众多(如PRSS1, PRSS2, PRSS12等),在消化、炎症、细胞凋亡及肿瘤侵袭等生理病理过程中发挥关键作用。
由于“PRSS”是一个庞大的家族,不同亚型的试剂盒在检测范围和应用上有所差异。以下是对该类试剂盒的通用详解:
| 产品名称 |
人丝氨酸蛋白酶(PRSS)ELISA试剂盒 |
英文名称 |
PRSS Elisa Kit |
| 规格 |
48T/96T |
货号 |
Y-E953 |
| 保存 |
2-8℃ |
用途 |
仅供科研 |
1. 检测原理

该类试剂盒普遍采用双抗体夹心法(Sandwich ELISA):13
包被:酶标板微孔中预先包被了针对特定人丝氨酸蛋白酶(如抗PRSS1抗体)的捕获抗体。
结合:加入标准品或待测样本后,样本中的目标蛋白酶与固相载体上的捕获抗体特异性结合。
检测:洗涤后,加入酶标检测抗体(通常为HRP标记的二抗或生物素-亲和素系统),形成“抗体-抗原-酶标抗体”夹心复合物。
显色:加入TMB底物显色液,HRP催化TMB产生蓝色,加入终止液(酸性溶液)后变为黄色。
测定:在酶标仪450nm波长下测定吸光度(OD值)。样本中目标蛋白的浓度与OD值呈正比,通过标准曲线计算出具体浓度。
样本处理与要求

样本处理的规范性直接影响检测结果的准确性。
样本类型:
血清:室温静置凝固1-2小时,离心取上清。
血浆:可使用EDTA、肝素钠或柠檬酸钠抗凝,离心取上清。
细胞培养上清/组织匀浆:离心去除沉淀后检测。
保存与禁忌:
避免反复冻融:样本若不立即检测,应分装冻存于-20℃(短期)或-80℃(长期)。
严禁:样本中绝对不能含有(),因为它会抑制HRP酶的活性。
标准操作流程 (SOP)

平衡:试剂盒从冷藏环境(2-8℃)取出,在室温下平衡30分钟。
配液:将浓缩洗涤液(如20×)用蒸馏水按说明书比例稀释。
加样:设定标准品孔和样本孔,加入100μL/孔,37℃温育60-90分钟。
洗涤:弃去孔内液体,洗涤液注满各孔,静置1分钟,甩干,吸水纸上拍干,重复5次。
加酶标试剂:每孔加入100μL酶标工作液,37℃温育30-60分钟。
再次洗涤:重复步骤。
显色与终止:每孔加入TMB显色液,避光37℃显色15分钟;加入终止液50μL终止反应。
读数与计算:在450nm波长下测定OD值,根据标准曲线计算样本浓度,并乘以稀释倍数。
4. 关键性能参数

不同亚型(如PRSS1, PRSS2, PRSS12等)的参数差异较大,一般指标如下表所示:
性能指标 典型数值/描述
检测范围 视亚型而定(如PRSS1为0.78-50ng/mL,PRSS23为0.312-20ng/mL)
灵敏度 最低检测限通常 < 0.1 ng/mL
特异性 识别天然和重组人目标蛋白,与其它家族成员无明显交叉反应
重复性 板内和板间变异系数(CV)通常 < 10% - 15%
保存条件 2-8℃避光保存,有效期通常为6个月
5. 临床与科研意义

消化系统研究:PRSS1(胰蛋白酶原-1)是胰腺分泌的主要酶原,其活性异常与胰腺炎发病机制密切相关。
神经系统:PRSS12(神经凋亡诱导蛋白酶)与神经发育和突触可塑性有关,其突变可能导致智力障碍。
肿瘤研究:某些丝氨酸蛋白酶在肿瘤微环境中高表达,参与细胞外基质降解和肿瘤侵袭转移。"