人受体酪氨酸激酶(Receptor Tyrosine Kinases, RTKs)ELISA试剂盒是一种用于定量检测人血清、血浆、细胞培养上清或组织匀浆中RTKs蛋白浓度的科研工具。
| 产品名称 |
人受体酪氨酸激酶(RTKs)ELISA试剂盒 |
英文名称 |
RTKs Elisa Kit |
| 规格 |
48T/96T |
货号 |
Y-E3048 |
| 保存 |
2-8℃ |
用途 |
仅供科研 |
RTKs是一类重要的细胞表面受体,在细胞生长、分化、代谢和血管生成等信号转导过程中发挥核心作用。其异常表达或突变与癌症、糖尿病及发育障碍等多种疾病密切相关。因此,检测RTKs的表达水平对于肿瘤机制研究、药物靶点验证及生物标志物开发具有重要意义。
以下是对人受体酪氨酸激酶(RTKs)ELISA试剂盒的详细解析:
1. 检测原理

该试剂盒采用双抗体夹心法(Sandwich ELISA):
包被:酶标板微孔中预先包被了抗人RTKs的特异性捕获抗体。
结合:加入标准品或待测样本后,样本中的RTKs抗原与固相载体上的捕获抗体特异性结合。
检测:洗涤后,加入酶标检测抗体(通常为HRP标记的抗人RTKs抗体)。该抗体与已固定的抗原结合,形成“抗体-抗原-酶标抗体”夹心复合物。
显色:加入TMB(3,3',5,5'-四甲基联苯胺)底物显色液,HRP催化TMB产生蓝色,加入终止液(通常为硫酸溶液)后变为黄色。
测定:在酶标仪450nm波长下测定吸光度(OD值)。样本中RTKs的浓度与OD值呈正比,通过标准曲线计算出具体浓度。
样本处理与要求

样本处理的规范性直接影响检测结果的准确性。
样本类型:
血清:使用无热原试管收集血液,室温静置2小时或4℃过夜,离心(1000 × g,20分钟)取上清。
血浆:可使用EDTA或肝素作为抗凝剂。采集后30分钟内离心(1000 × g,15分钟)取上清。
组织匀浆/细胞上清:在预冷的PBS中充分研磨或离心取上清。
保存与禁忌:
避免反复冻融:样本若不立即检测,应按单次用量分装,冻存于-20℃(短期)或-80℃(长期)。
严禁:样本中绝对不能含有(),因为它会抑制HRP酶的活性。
标准操作流程 (SOP)

平衡:将试剂盒从冷藏环境(2-8℃)取出,在室温(20-25℃)下平衡15-30分钟。
配液:将浓缩洗涤液(如20×)用蒸馏水按说明书比例稀释备用。
加样:
标准品:按说明书进行梯度稀释(如0、1.25、2.5、5、10、20 ng/mL等)。
待测样本:通常需用样本稀释液进行预稀释(如稀释5倍)。
温育:每孔加入标准品或稀释后的样本,37℃温育60分钟。
洗涤:弃去孔内液体,注满洗涤液,静置1分钟,弃去液体并在吸水纸上拍干,重复5次。
加酶标试剂:每孔加入HRP标记的检测抗体,37℃温育60分钟。
再次洗涤:重复步骤。
显色与终止:每孔加入TMB显色液,避光37℃显色15分钟;加入终止液50μL终止反应。
读数与计算:以空白孔调零,在450nm波长下测定OD值(需在15分钟内完成)。根据标准曲线计算样本浓度,并乘以稀释倍数。
4. 关键性能参数

不同品牌试剂盒的参数可能略有差异,一般指标如下表所示:
性能指标 典型数值/描述
检测范围 1.25 - 20 ng/mL (具体视品牌而定)
灵敏度 最低检测限通常 < 0.1 ng/mL
特异性 识别天然和重组人RTKs,与其它可溶性结构类似物无交叉反应
重复性 板内变异系数(CV)< 10%,板间CV < 15%
保存条件 2-8℃避光保存,有效期通常为6个月
5. 临床与科研意义

肿瘤研究:RTKs(如EGFR、HER2、VEGFR等)是癌症治疗的重要靶点。检测其表达水平有助于评估肿瘤的恶性程度和预后。
药物筛选:用于高通量筛选RTKs抑制剂,评估药物对靶点的抑制效果。
信号通路研究:研究细胞外生长因子刺激下,RTKs的磷酸化及下游信号通路的激活机制。