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产品描述
羧肽酶A4(CPA4)是一种锌依赖性外肽酶，主要通过切割蛋白质C端芳香族或脂肪族氨基酸参与生物活性肽加工，在肿瘤侵袭、神经调节等过程中发挥作用。该重组蛋白多以大肠杆菌或哺乳动物细胞为表达宿主，纯度可达95%-97%，带有His标签等纯化标签，可作为阳性对照、免疫原用于SDS-PAGE、WB、ELISA等实验，还可用于肿瘤发病机制研究及相关药物筛选。保存条件为避免反复冻融，2-8℃可保存1个月，-80℃可保存12个月，保质期内损失率低于5%，仅用于体外科研。
商品介绍
商品介绍
| 物种 | Homo sapiens (Human，人) | 货号 | GOY-01D793 |
| 性状 | 冻干粉 | 实际分子量 | 45kDa(差异分析请参阅说明书) |
产品名称：羧肽酶A4(CPA4)重组蛋白
物种：Homo sapiens (Human，人)
英文名称：Recombinant Carboxypeptidase A4 (CPA4)
酶与激酶
型号：GOY-01D793
物种：Homo sapiens (Human，人)
来源：原核表达
宿主E.coli
内毒素水平：<1.0EU/μg(LAL法测定)
亚细胞定位：：分泌
预测分子量：44.9kDa
实际分子量：45kDa(差异分析请参阅说明书)
片段与标签：Lys55~Tyr421 with N-terminal His Tag
缓冲液成份：100mM NaHCO3, 500mM NaCl缓冲液（pH8.3,含有1mM EDTA, 1mM DTT, 0.01% SKL, 5% Trehalose和Proclin300）
性状：冻干粉
纯度：> 97%
等电点：6.0
应用：Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.
规格10μg50μg200μg1mg5mg
重组蛋白实验核心流程
重组蛋白实验本质是通过基因工程技术，让宿主细胞表达目标蛋白，再经过分离纯化得到可用的蛋白，核心流程分为5个关键步骤：
1. 目的基因的获取与优化
基因来源：可以从cDNA文库中PCR扩增、人工合成，或者从基因组DNA中克隆（针对原核生物）
密码子优化：根据宿主细胞（如大肠杆菌、CHO细胞）的密码子偏好性优化基因序列，提升蛋白表达量
关键元件添加：在基因两端添加酶切位点、标签序列（His-tag、GST-tag）、信号肽等，方便后续克隆、表达和纯化
2. 重组表达载体构建
载体选择：根据宿主类型选择对应的载体，原核常用pET、pGEX系列；真核常用pcDNA、pPICZ系列
克隆方法：通过限制性内切酶酶切+连接酶连接，或同源重组、Gateway克隆等方法，将目的基因插入载体
载体验证：通过菌落PCR、酶切鉴定和DNA测序，确认重组载体构建成功
3. 宿主细胞转化/转染
原核宿主：常用大肠杆菌BL21(DE3)，通过热激法或电穿孔法将重组质粒导入细胞
真核宿主：分为哺乳动物细胞（CHO、HEK293）、酵母（毕赤酵母、酿酒酵母）、昆虫细胞等，采用脂质体转染、电转、病毒感染等方法
阳性筛选：利用载体上的抗性基因（如氨苄青霉素、新霉素）筛选成功导入重组载体的细胞
4. 重组蛋白诱导表达
原核表达诱导：常用IPTG诱导lac启动子，控制诱导温度（16-37℃）、IPTG浓度（0.1-1mM）和诱导时间（4-24h），优化表达条件
真核表达诱导：哺乳动物细胞常用瞬时表达或稳定表达系；酵母常用甲醇诱导AOX启动子；昆虫细胞通过病毒感染后表达
表达形式判断：通过SDS-PAGE和Western Blot检测蛋白表达，判断是可溶性表达还是包涵体表达
5. 重组蛋白分离纯化
包涵体处理：如果形成包涵体，需要先裂解细胞，收集包涵体，再通过变性、复性获得有活性的蛋白
可溶性蛋白纯化：利用标签序列进行亲和层析（Ni-NTA亲和柱纯化His-tag蛋白），再通过离子交换层析、凝胶过滤层析等方法进一步纯化
蛋白鉴定：通过SDS-PAGE、Western Blot、质谱分析等方法验证蛋白的纯度和正确性
活性检测：根据蛋白的功能特性，选择对应的活性检测方法（如酶活测定、ELISA、细胞实验等）
应用范围
免疫学研究：作为阳性对照或免疫原用于抗体生产。
分子检测：Western Blot（WB）、SDS-PAGE分析。
功能研究：参与糖酵解途径、肿瘤免疫调控等机制研究。
检测方法
Lowry法：碱性条件下与铜离子反应生成络合物，750nm比色定量。
SDS-PAGE：考马斯亮蓝染色验证分子量及纯度。
注意
溶解建议：使用无菌PBS或去离子水复溶，避免剧烈震荡。
实验用途：仅限科研，不适用于临床诊断或治疗。
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手机版：羧肽酶A4(CPA4)重组蛋白
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