产品描述
过氧化还原酶1是一种抗氧化酶,属于过氧化物酶家族,能够清除细胞内的过氧化氢和过氧亚硝酸盐,参与细胞氧化还原平衡的调节,在抗氧化应激、细胞增殖和凋亡等过程中发挥重要作用。该重组蛋白一般以大肠杆菌为宿主表达,有50μg、200μg、1mg等多种包装规格,可用于蛋白质相互作用研究、酶活性分析以及作为阳性对照用于WB、ELISA等实验,需低温保存以维持活性。
| 产品名称 |
过氧化还原酶1(PRDX1)重组蛋白
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物种 |
MHomo sapiens (Human,人) |
| 型号 |
GOY-01D661 |
来源 |
原核表达 |
| 预测分子量 |
23.4kDa |
实际分子量 |
23kDa(差异分析请参阅说明书) |
商品详情
产品名称:过氧化还原酶1(PRDX1)重组蛋白
物种:Homo sapiens (Human,人)
英文名称:Recombinant Peroxiredoxin 1 (PRDX1)
MSP23; NKEFA; PAG; PAGA; PAGB; TDPX2; Natural killer cell-enhancing factor A; Proliferation-associated; Thioredoxin peroxidase 2; Thioredoxin-dependent peroxide reductase 2
型号:GOY-01D661
酶与激酶
物种:Homo sapiens (Human,人)
来源:原核表达
宿主E.coli
内毒素水平:<1.0EU/μg(LAL法测定)
亚细胞定位::细胞质
预测分子量:23.4kDa
实际分子量:23kDa(差异分析请参阅说明书)
片段与标签:Met1-Lys199 with N-terminal His Tag
缓冲液成份:20mM Tris, 150mM NaCl缓冲液(pH8.0, 含有1mM EDTA, 1mM DTT, 0.01% SKL, 5% Trehalose和Proclin300)
性状:冻干粉
纯度:> 90%
等电点:7.7
应用:Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.
重组蛋白实验核心流程
重组蛋白实验本质是通过基因工程技术,让宿主细胞表达目标蛋白,再经过分离纯化得到可用的蛋白,核心流程分为5个关键步骤:
1. 目的基因的获取与优化
基因来源:可以从cDNA文库中PCR扩增、人工合成,或者从基因组DNA中克隆(针对原核生物)
密码子优化:根据宿主细胞(如大肠杆菌、CHO细胞)的密码子偏好性优化基因序列,提升蛋白表达量
关键元件添加:在基因两端添加酶切位点、标签序列(His-tag、GST-tag)、信号肽等,方便后续克隆、表达和纯化
2. 重组表达载体构建
载体选择:根据宿主类型选择对应的载体,原核常用pET、pGEX系列;真核常用pcDNA、pPICZ系列
克隆方法:通过限制性内切酶酶切+连接酶连接,或同源重组、Gateway克隆等方法,将目的基因插入载体
载体验证:通过菌落PCR、酶切鉴定和DNA测序,确认重组载体构建成功
3. 宿主细胞转化/转染
原核宿主:常用大肠杆菌BL21(DE3),通过热激法或电穿孔法将重组质粒导入细胞
真核宿主:分为哺乳动物细胞(CHO、HEK293)、酵母(毕赤酵母、酿酒酵母)、昆虫细胞等,采用脂质体转染、电转、病毒感染等方法
阳性筛选:利用载体上的抗性基因(如氨苄青霉素、新霉素)筛选成功导入重组载体的细胞
4. 重组蛋白诱导表达
原核表达诱导:常用IPTG诱导lac启动子,控制诱导温度(16-37℃)、IPTG浓度(0.1-1mM)和诱导时间(4-24h),优化表达条件
真核表达诱导:哺乳动物细胞常用瞬时表达或稳定表达系;酵母常用甲醇诱导AOX启动子;昆虫细胞通过病毒感染后表达
表达形式判断:通过SDS-PAGE和Western Blot检测蛋白表达,判断是可溶性表达还是包涵体表达
5. 重组蛋白分离纯化
包涵体处理:如果形成包涵体,需要先裂解细胞,收集包涵体,再通过变性、复性获得有活性的蛋白
可溶性蛋白纯化:利用标签序列进行亲和层析(Ni-NTA亲和柱纯化His-tag蛋白),再通过离子交换层析、凝胶过滤层析等方法进一步纯化
蛋白鉴定:通过SDS-PAGE、Western Blot、质谱分析等方法验证蛋白的纯度和正确性
活性检测:根据蛋白的功能特性,选择对应的活性检测方法(如酶活测定、ELISA、细胞实验等)
应用范围
免疫学研究:作为阳性对照或免疫原用于抗体生产。
分子检测:Western Blot(WB)、SDS-PAGE分析。
功能研究:参与糖酵解途径、肿瘤免疫调控等机制研究。
检测方法
Lowry法:碱性条件下与铜离子反应生成络合物,750nm比色定量。
SDS-PAGE:考马斯亮蓝染色验证分子量及纯度。
注意事项
溶解建议:使用无菌PBS或去离子水复溶,避免剧烈震荡。
实验用途:仅限科研,不适用于临床诊断或治疗。
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