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人膜攻击复合物(MAC)ELISA试剂盒

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销售商：上海研生实业有限公司

产品概述：

"人膜攻击复合物（MAC，全称Membrane Attack Complex）ELISA试剂盒是一种用于体外定量检测人血清、血浆、组织匀浆等生物样本中sC5b-9（可溶性C5b-9复合物）浓度的科研工具。

MAC是补体系统末端通路活化的标志性产物，其检测对于研究补体激活相关的免疫病理机制具有重要意义。

🧪 检测原理

试剂盒通常采用双抗体夹心法原理：

包被：酶标板微孔中已预先包被人MAC捕获抗体。

结合：向微孔中加入待测样本（如血清、血浆）或标准品。样本中的MAC（sC5b-9）会与固相抗体特异性结合。

酶联：加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体，与已结合的抗原形成“抗体-抗原-酶标抗体”复合物。

显色：加入TMB底物液，HRP催化底物产生蓝色显色反应。

终止与读数：加入终止液（通常为硫酸）使反应终止，溶液颜色由蓝色转变为黄色。在酶标仪450nm波长处测定吸光度（OD值）。OD值的大小与样本中MAC的浓度呈正相关。

标准操作流程 (SOP)

1. 实验前准备

试剂平衡：从冰箱取出试剂盒，在室温（20-25℃）下平衡至少20分钟。

配液：将浓缩洗涤液（如20×）用蒸馏水稀释至1×工作浓度。若洗涤液有结晶，需在室温轻摇溶解。

标准品复溶：将冻干标准品按说明书要求复溶（如加入1ml样品稀释液），静置10分钟后混匀，然后进行梯度稀释（如160、80、40、20、10、5 pg/mL）。

2. 加样

设置孔位：设置空白孔（调零用）、标准品孔（不同浓度梯度）、样本孔。

加样操作：每孔加入50-100μL标准品或待测样本。

3. 温育与洗涤

温育：用封板膜封住板孔，37℃恒温箱温育一定时间（通常为30-60分钟）。

洗涤：弃去孔内液体，甩干，每孔注满洗涤液，静置1分钟后弃去，拍干。重复此过程5次。

4. 加酶标试剂

加酶：除空白孔外，每孔加入酶标试剂（HRP标记抗体）50-100μL。

温育：37℃避光温育30-60分钟。

洗涤：再次洗板5次，拍干。

5. 显色与终止

显色：每孔加入显色剂A液和B液各50μL，37℃避光显色10-15分钟。

终止：每孔加入50μL终止液，此时溶液颜色由蓝变黄。

读数与计算

测定：以空白孔调零，在450nm波长下测定各孔OD值（需在加终止液后15分钟内完成）。

计算：

以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘制标准曲线。

根据样本OD值在标准曲线上查出对应浓度。

若样本经过稀释，需乘以稀释倍数。"

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