人免疫抑制酸性蛋白(IAP)ELISA试剂盒是一种用于体外定量检测人血清、血浆、细胞培养上清液及其他生物体液中IAP浓度的科研工具。IAP(Immunosuppressive Acidic Protein)是一种与肿瘤免疫逃逸、病情进展及预后评估相关的糖蛋白。
⚙️ 检测原理.
试剂盒采用双抗体夹心法(Sandwich ELISA)。
包被:微孔板上已预包被抗人IAP的特异性抗体。
结合:向微孔中加入标准品或待测样本,样本中的IAP抗原与固相抗体结合。
酶标反应:洗涤后,加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体,形成“固相抗体-IAP-酶标抗体”复合物。
显色与测定:洗涤去除未结合的酶标抗体后,加入TMB底物液。HRP酶催化TMB显色(通常变为蓝色)。加入终止液后,颜色由蓝变黄。使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)。样本中IAP的浓度与OD值成正比,通过标准曲线即可计算出具体含量。
主要组分.
组分 描述 保存条件
酶标板 96孔或48孔,已包被捕获抗体 2-8℃保存
标准品 人IAP纯品(冻干粉或溶液) -20℃或2-8℃
酶标试剂 HRP标记的检测抗体 2-8℃避光
样本稀释液 用于稀释高浓度样本 2-8℃
浓缩洗涤液 通常为20×或30×浓缩液 2-8℃
底物溶液 TMB显色液(A液/B液) 2-8℃避光
终止液 2M 硫酸 常温
🧪 样本采集与处理.
血清:全血在室温下静置30分钟使其凝固,然后以1000×g离心20分钟,取上清液检测。
血浆:可使用EDTA或肝素作为抗凝剂,采集后尽快离心(1000×g,15分钟)取上清。
细胞/组织样本:需制备匀浆或上清液,离心后取上清检测。
保存:样本如不立即检测,应分装保存于-20℃或-80℃,严禁反复冻融。
结果计算.
数据处理:首先计算标准品和样本复孔的OD值平均值。
绘制标准曲线:以标准品的浓度为横坐标(通常为对数坐标),OD值为纵坐标(线性坐标),在坐标纸上或使用专业软件(如Excel、Curve Expert)绘制标准曲线。
查算浓度:根据样本的OD值在标准曲线上查出对应的浓度。如果样本经过了稀释,最终结果需要乘以稀释倍数。"