人免疫球蛋白轻链lambda(Immunoglobulin Light Chain Lambda, λ-IgLC)ELISA试剂盒是一种用于体外定量检测生物样本中λ轻链浓度的高灵敏度科研工具。免疫球蛋白轻链(包括κ和λ型)是抗体的重要组成部分,其检测在多发性骨髓瘤、轻链沉积病及肾功能损伤等研究中具有重要价值。
以下是对该试剂盒的详细解析:
⚙️ 检测原理.
人λ-IgLC ELISA试剂盒通常采用双抗体夹心法(Sandwich ELISA)。
包被: 酶标板微孔中预先包被了高亲和力的抗人λ轻链单克隆抗体(捕获抗体)。
加样与结合: 加入待测样本后,样本中的λ-IgLC抗原与固相抗体特异性结合。
酶标抗体结合: 加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体(通常也是抗人λ轻链抗体或多抗),形成“捕获抗体-抗原-酶标抗体”的夹心复合物。
显色与终止: 加入底物TMB(四甲基联苯胺)显色(蓝色),随后加入终止液(通常为硫酸溶液),反应终止并变为黄色。
检测: 在酶标仪450nm波长下测定吸光度(OD值)。样本中λ-IgLC的浓度与OD值呈正相关,通过标准曲线即可计算出其具体浓度。
典型性能参数.
不同品牌试剂盒参数略有差异,以下为常见参考值:
参数项 描述
检测范围 视具体品牌而定(如0.039 ng/mL - 2.5 ng/mL或更宽)
灵敏度 最低检测限通常 < 0.02 ng/mL
特异性 识别天然和重组人λ-IgLC,不与κ轻链及其他血清蛋白交叉反应
重复性 板内/板间变异系数(CV%)通常 < 10%-15%
样本类型 血清、血浆(EDTA/肝素)、细胞培养上清、组织匀浆、尿液
操作步骤.
试剂平衡: 试剂盒从2-8℃取出,室温(20-25℃)平衡15-30分钟。
配液: 配制洗涤液(如20×或30×浓缩液稀释为1×)。
加样: 设置标准品孔(梯度稀释)和样本孔,建议做复孔。加入样本后,37℃温育60分钟。
洗板: 弃液,洗涤液注满每孔,静置后弃去,重复5次,拍干。
加酶: 每孔加入酶标试剂(HRP标记抗体),37℃温育60分钟。
显色: 加入底物A、B液,37℃避光显色15分钟。
终止与读数: 加入终止液,15分钟内于450nm测定OD值,计算浓度。
样本处理与要求.
血清: 室温静置2小时或4℃过夜,离心取上清。
血浆: EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝,采集后30分钟内离心取上清。
尿液/组织匀浆: 需离心去除颗粒物。
保存: 样本若不立即检测,应分装后冻存于-20℃(短期)或-80℃(长期),避免反复冻融。"