人免疫球蛋白G(IgG)ELISA试剂盒是一种用于体外定量检测人血清、血浆、细胞培养上清等生物样本中总免疫球蛋白G(Immunoglobulin G, IgG)含量的科研工具。
IgG是血清中含量最丰富的抗体类型,约占总免疫球蛋白的75%,在抗感染、免疫调节及作为疫苗接种效果评价指标等方面具有重要意义。以下我为你整理的详细操作与原理解析:
| 产品名称 |
人免疫球蛋白G(IgG)ELISA试剂盒 |
英文名称 |
IgG ELISA Kit |
| 规格 |
48T/96T |
货号 |
Y-E2880 |
| 保存 |
2-8℃ |
用途 |
仅供科研 |
🧪 检测原理

该试剂盒通常采用双抗体夹心法(Sandwich ELISA)。
包被: 酶标板微孔中预先包被了抗人IgG的特异性捕获抗体。
结合: 加入待测样本(或标准品)后,样本中的IgG会与孔壁上的抗体结合。
检测: 加入酶标记(通常为HRP辣根过氧化物酶)的检测抗体,它会与已结合的IgG结合,形成“固相抗体-IgG-酶标抗体”的夹心复合物。
显色: 洗涤去除未结合物质后,加入底物TMB(3,3',5,5'-四甲基联苯胺)。HRP酶会催化TMB氧化,产生蓝色产物,加入终止液(通常为硫酸)后颜色由蓝变黄。
定量: 在酶标仪450nm波长下测定吸光度(OD值)。样本的OD值与其中IgG的浓度呈正比。
主要组成成分

组分名称 规格示例 (96T) 保存条件 主要用途
酶标板 96孔 (8孔×12条) 2-8℃ 预包被抗人IgG抗体。
标准品 冻干粉或液体 -20℃或2-8℃ 用于制作标准曲线(确定浓度)。
酶标抗体 10mL×1瓶 2-8℃ HRP标记的抗人IgG抗体。
标准品稀释液 60mL×1瓶 2-8℃ 溶解和稀释标准品。
样品稀释液 60mL×1瓶 2-8℃ 稀释高浓度样本(如血清)。
浓缩洗涤液 30mL×1瓶 (20×) 常温 使用前需用蒸馏水稀释。
显色剂 (TMB) 10mL×1瓶 2-8℃ (避光) 酶底物,产生颜色反应。
终止液 5mL×1瓶 常温 终止酶促反应。
标准操作流程 (SOP)

平衡与配液:
试剂盒从冰箱取出,在室温(18-25℃)平衡15-30分钟。
将浓缩洗涤液(如20×)用蒸馏水稀释至工作浓度。
标准品稀释:
按说明书进行倍比稀释(例如:100 ng/mL → 50 ng/mL → 25 ng/mL...),制成标准曲线梯度。
加样:
标准孔:加入不同浓度的标准品(通常50-100μL)。
样本孔:加入待测样本(通常50-100μL)。
空白孔:不加样本,只加显色剂(作为空白对照)。
温育:
用封板膜封板,37℃温育30-60分钟。
洗板:
弃去孔内液体,吸水纸上拍干。
每孔注满洗涤液,静置30秒-1分钟,甩去洗涤液,拍干。重复5次。
加酶与洗板:
每孔加入酶标试剂(空白孔除外),37℃温育30-60分钟。
重复洗板步骤5次。
显色与终止:

每孔加入显色剂TMB,37℃避光显色10-15分钟。
每孔加入终止液,轻轻震荡混匀,颜色由蓝变黄。
测定:
在15分钟内,使用酶标仪在450nm波长下测定各孔的OD值。"