人免疫球蛋白E(IgE)ELISA试剂盒是一种用于体外定量检测人血清、血浆、细胞培养上清液等生物样本中免疫球蛋白E(IgE)含量的科研工具。
IgE在过敏反应、寄生虫免疫及某些自身免疫疾病中扮演关键角色,因此该试剂盒广泛应用于免疫学和过敏性疾病的相关研究。
⚙️ 检测原理.
试剂盒采用双抗体夹心法(Sandwich ELISA)。
包被:微孔板上已预包被抗人IgE的特异性单克隆抗体。
结合:向微孔中加入标准品或待测样本,样本中的IgE抗原与固相抗体结合。
酶标反应:洗涤后,加入生物素化或辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体。它会与已结合的IgE抗原结合,形成“固相抗体-抗原-酶标抗体”夹心复合物。
显色与测定:洗涤去除未结合的酶标抗体后,加入TMB底物液。HRP酶催化TMB显色(通常变为蓝色)。加入终止液后,颜色由蓝变黄。使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)。样本中IgE的浓度与OD值成正比,通过标准曲线即可计算出具体含量。
主要组分.
组分 描述 保存条件
酶标板 96孔或48孔,已包被捕获抗体 2-8℃保存
标准品 人IgE纯品(冻干粉或溶液) -20℃或2-8℃
酶标试剂 HRP标记的链霉亲和素或检测抗体 2-8℃避光
样本稀释液 用于稀释高浓度样本 2-8℃
浓缩洗涤液 通常为20×或30×浓缩液 2-8℃
底物溶液 TMB显色液(A液/B液) 2-8℃避光
终止液 2M 硫酸 常温
🧪 样本采集与处理.
样本的质量直接影响检测结果的准确性:
血清:全血在室温下静置30分钟使其凝固,然后以1000×g离心10-15分钟,取上清液检测。
血浆:可使用EDTA或肝素作为抗凝剂,采集后尽快离心(2000-3000转/分,15分钟)取上清。
细胞培养上清:离心去除细胞碎片,取上清检测。
保存:样本如不立即检测,应分装保存于-20℃或-80℃,严禁反复冻融。
禁忌:不能检测含有()的样本,因为它会抑制辣根过氧化物酶(HRP)的活性。"