人美洲商陆素(PWM)ELISA试剂盒是一种用于体外定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液等生物样本中美洲商陆素(Pokeweed Mitogen, PWM)含量的科研工具。
以下是基于现有资料整理的该试剂盒详细操作与原理详解:
⚙️ 检测原理.
该试剂盒通常采用双抗体夹心法(Sandwich ELISA)。
包被:微孔板上已预包被针对PWM的特异性抗体。
结合:向微孔中加入标准品或待测样本,样本中的PWM抗原与固相抗体结合。
酶标反应:洗涤后,加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体,形成“固相抗体-抗原-酶标抗体”复合物。
显色与测定:加入TMB底物液显色,再加入终止液停止反应。在酶标仪450nm波长下测定吸光度(OD值)。样本中PWM的浓度与OD值成正比,通过标准曲线计算出具体含量。
主要组分
不同品牌的试剂盒配置略有差异,核心组分通常包括:
注意事项.
酶标板 96孔或48孔,已包被捕获抗体 使用后需密封保存于2-8℃
标准品 纯化的PWM蛋白 通常为冻干粉,需临用前复溶配制
酶标试剂 HRP标记的检测抗体 避光保存,防止酶失活
样本稀释液 用于稀释高浓度样本 需按说明书比例稀释
浓缩洗涤液 通常为20×或50×浓缩液 需用蒸馏水稀释后使用
底物A液/B液 TMB显色液 需避光,现配现用
终止液 2M 硫酸 具腐蚀性,操作需小心
🧪 样本采集与处理.
血清:使用不含热原和内毒素的试管采集血液,室温凝固10-20分钟后,2000-3000转/分离心10-20分钟,取上清检测。
血浆:可使用EDTA、柠檬酸盐或肝素作为抗凝剂。采集后尽快离心取上清。
细胞上清:培养液离心(1000-3000转/分)去除细胞碎片,取上清检测。
保存:样本如不立即检测,应分装保存于-20℃或-70℃,严禁反复冻融。
结果计算
数据处理:计算标准品和样本复孔的OD值平均值。
绘制标准曲线:以标准品浓度为横坐标(通常为对数坐标),OD值为纵坐标(线性坐标),绘制标准曲线。
查算浓度:根据样本的OD值在标准曲线上查出对应的浓度。若样本经过稀释,需乘以稀释倍数。"